抗-Cas9抗体（D10A/H840A 突变体）

CRISPR相关核酸内切酶Cas9/Csn1（UniProt Q99ZW2；也称SpyCas9）由化脓性链球菌（Streptococcus pyogenes ）血清型M1 基因Cas9（也称csn1）基因（基因ID 901176）编码。规律间隔性成簇短回文重复序列 (CRISPR) 是含有碱基序列短重复序列的DNA 位点，与先前可移动元件（antecedent mobile element）互补并靶向侵袭的核酸。每次重复序列之后是以前在病毒暴露而产生的间隔DNA的短片段。Cas9 化脓性链球菌血清型M1′的CRISPR免疫系统中必需的核酸内切酶，赋予机体对外来遗传元件（如质粒和噬菌体）的抵抗力。CRISPR簇被转录并加工成CRISPR RNA（crRNA）。在II型CRISPR系统中，正确处理pre-crRNA需要反式编码的小RNA（tracrRNA）、内源核糖核酸酶3(rnc)和Cas9。Cas9/crRNA/tracrRNA以内切核苷酸的形式裂解与间隔子互补的线性或环状dsDNA靶标。与crRNA不互补的靶链首先进行内切，然后进行3′-5′外切。催化性残基（RuvC中的D10A和HNH中的H840A）的突变可以将 Cas9转化为DNA切口酶（Cas9n），该酶只能裂解与crRNA,互补的链，从而最大程度减少非靶标活性（off-target activity）。

观测值〜160 kDa。计算分子量为158.3 kDa（根据AKA60242.1）。在一些裂解液中可能会观察到未表征的条带。

两种KLH偶联肽的混合物，对应于带D10A和H840A突变的Cas9靶部位序列。

使用经验证可用于免沉淀和蛋白印迹法的该兔多克隆抗-Cas9（D10A/H840A突变体，货号 ABC1490）抗体检测Cas9 D10A/H840A切口酶突变体。

免疫沉淀分析：10 µg 代表性批次对 500 µg转染的HEK293细胞裂解液中外源性表达的Cas9切口酶D10A突变体（带有C末端Myc-DDK 标签）进行了免疫沉淀。

研究范畴
二抗&对照抗体

该多克隆抗体将检测带有RuvC-I区域D10A突变和/或 HNH结构域（如AKA60242.1）H840A突变的Cas9，但是不能检测不带D10A或H840A 突变（如NP_269215）的Cas9 。

亲和纯化。

纯化的兔多克隆抗体，溶于含有0.1 M Tris-甘氨酸（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.05％叠氮化钠的缓冲液中。

自收到之日起，在2-8°C条件下可稳定保存1年。

通过蛋白质印迹法在表达Cas9切口酶D10A的HEK293转染子的裂解液中进行评价。

蛋白质印迹分析：2 µg 该抗体对 10 µg转染的HEK293细胞裂解液中外源性表达的Cas9切口酶D10A突变体（带有C末端Myc-DDK 标签）进行了免疫沉淀。

浓度：请参考特定批次的数据表。

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