Anti-GAD65 Antibody

研究子类别
神经递质 & 受体

研究类别
神经科学

免疫组化：（1μ g/ml*参见方案）

蛋白质印迹

最佳工作稀释度必须由最终用户确定。

MAB351

免疫组化

的应用说明1）用含有1%多聚甲醛、0.34%L-赖氨酸和0.05%m-高碘酸盐（1%PLP）的100 mM磷酸盐缓冲液pH值7.4灌注大鼠。

2）在1%PLP中后固定大脑1-2小时。

3）将脑转移到含30%蔗糖的100 mM磷酸盐缓冲液中，在摇床平台上在+4°C下轻轻搅拌48-60小时。

4）用滑动式切片机，切取冰冻小脑30mm切片。切片后，将其收集在100 mM冷磷酸盐缓冲液小瓶中。

5）切片在含1.5%正常血清和0.2%Triton X-100的PBS中培养30分钟。

6）在摇床平台上，将切片与MAB351（在含有1.5%正常血清和0.2%Triton X-100的PBS中稀释1 μg/ml）在+4°C培养12-36小时。

7）在摇床平台上，用PBS冲洗切片8次，每次冲洗10-15分钟。

8）用标准二抗检测系统（PAP、ABC等）检测。

9）安装切片，脱水，涂盖玻片。

抗-GAD抗体已发表65 kDa亚型，克隆GAD-6可检测谷氨酸脱羧酶&水平，&经验证可用于IH &WB。

识别在脑中识别的两种GAD亚型的低分子量亚型（Gottlieb，et al.，1986；Chang &Gottlieb，1988）。这种单克隆抗体可用于脑或胰腺的免疫组织化学定位。抗GAD也已用于在蛋白质印迹上标记纯化的GAD（Chang &Gottlieb，1988）。

对照
大鼠脑组织

人脑裂解物

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65kda

谷氨酸脱羧酶（GAD; E.C.4.1.1.15）是负责将谷氨酸转化为γ-氨基丁酸（GABA）的一种酶，γ-氨基丁酸是大脑较高区域的主要抑制递质，在胰岛中被认为是一种旁分泌激素。GAD的两种分子形式（65 kDa和67 kDa，两种形式之间的氨基酸相似度为64％）是高度保守的，两种形式都在CNS、胰岛细胞、睾丸、输卵管和卵巢中表达。两种亚型在大鼠和小鼠的脑细胞质中区域分布（Sheikh，S. et al. 1999）。GAD65是一种两亲性膜锚定蛋白（585a.a.），由人类10号染色体进行编码，负责囊泡GABA的产生。GAD67位于细胞质中（594个氨基酸），由2号染色体进行编码，其可能是导致大量细胞质GABA产生的原因。GAD的表达在大鼠脊髓神经发育过程中发生变化。GAD65在E13周围的连合轴突中瞬时表达，但在第二天被下调，而GAD67的表达主要在这些神经元的躯干中增加（Phelps，P. et al. 1999）。在成熟的大鼠胰腺中，GAD65和GAD67似乎存在差异定位，GAD65主要存在于含胰岛素的β细胞中，而GAD67存在于含胰高血糖素的（A）细胞中（Li，L. et al. 1995）。GAD67的表达似乎具有特别的可塑性，并且可以响应实验操作（例如神经元刺激或横切）或疾病进展以及诸如精神分裂症等突发疾病而发生变化（Volk et al.，2000）。 两种GAD亚型的共定位也显示出GAD65/GAD67分布的变化，这一变化与某些疾病状态（例如IDDM和SMS）相关。

纯化的大鼠脑谷氨酸脱羧酶。

浓度：请参考批次特异性浓缩物的分析证书。

形式：纯化

纯化的免疫球蛋白。 从10 mM磷酸钾，70 mM氯化钠，pH值7.4、0.02%叠氮化钠中冻干。用100 μL无菌水（1 mg/mL）复溶。

纯化的蛋白 A

将冻干物料在-20°C保存12个月复溶后，以未稀释等分试样在-20°C可冷冻保存长达6个月。应避免反复冻/融循环。

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