抗-DNA-RNA杂交抗体，克隆S9.6

DNA-RNA杂交体是真核细胞中的天然存在，其水平在高转录活性位点较高。它们是具有转录调节功能的非规范核酸结构。据报道它们的存在使基因座易于发生染色体断裂。形成DNA:RNA的基因座产生双链A/B中间构象，在互补的、置换的DNA链上具有单链核酸结合蛋白的第二个靶标。它们显示出对DNA甲基转移酶的活性具有抗性。DNA:RNA杂交体的形成与许多神经系统疾病有关。DNA:RNA解旋酶senataxin(SETX)中的突变与4型肌萎缩性侧索硬化症的显性少年形式和2型共济失调性动眼性失用症的隐性形式有关。

通过用DNA依赖性RNA聚合酶转录phi X174单链DNA制备的DNA-RNA杂聚物双链体（Boguslawski，S.J.，et al.（1986）.J. Immunol Methods.89（1）:123-130）。

抗DNA-RNA杂交体，克隆S9.6，目录号MABE1095号是一种高度特异性的小鼠单克隆抗体，靶向DNA-RNA杂交体，已在亲和结合测定、染色质免疫沉淀（ChIP）、ChIP-seq、斑点印迹、免疫细胞化学和免疫沉淀中进行了检验。

斑点印迹分析：与野生型菌株的提取物相比，0.2 µg/mL的代表性批次检测到来自RNase H缺陷型酵母菌株的基因组提取物中DNA-RNA杂交体的水平增强（由Lorenzo Costantino博士提供，Koshland Lab, University of California at Berkley, U.S.A.）。

亲和结合测定：克隆S9.6均等地结合DNA-RNA杂聚物和聚(I)-聚（dC），但是要达到相似的结合程度，需要100倍更高水平的聚(A)-聚（dT）。克隆S9.6不结合单链DNA、双链DNA和RNA以及核糖体RNA（Boguslawski，S.J.，et al.（1986）.J. Immunol Methods.89（1）:123-130）。

染色质免疫沉淀（ChIP）分析：在HeLa细胞中，在shRNA介导的BRCA1或BRCA2的敲落（但没有敲落PCID2或RAD51）后，一个代表性批次在四个活跃转录的基因处检测到增加的DNA RNA杂交体（Bhatia，V.，et al.（2014）.Nature.511（7509）:362-365）。

染色质免疫沉淀（ChIP）分析：一个代表性批次使用HeLa染色质制备物检测到在β-肌动蛋白基因上形成的R环。染色质制备物的RNase H处理阻止了克隆S9.6免疫沉淀目标染色质片段（Skourti-Stathaki，K.，et al.（2011）.Mol.Cell.42（6）:794-805）。

染色质免疫沉淀-测序（ChIP-seq）分析：一个代表性批次通过ChIP-seq分析检测到发芽酵母中DNA-RNA杂交体的全基因组分布（El Hage，A.，et al.（2014）.PLoS Genet.10（10）:e1004716）。

免疫细胞化学分析：一个代表性批次通过荧光免疫细胞化学染色对甲醇固定的H1人胚胎干细胞（hESCs）和甲醛固定的HeLa细胞进行免疫定位核R环（Bhatia，V.，et al.（2014）.Nature.511(7509):362-365; Ginno, P.A., et al. (2012).Mol.Cell.45(6):814-825）。

免疫沉淀分析：一个代表性批次在体外免疫沉淀转录的R环底物（DNA-RNA杂交体），但非双链DNA（dsDNA）（Ginno，P.A.，et al.（2012）.Mol.Cell.45（6）:814-825）。

研究类别
表观遗传学&核功能

克隆S9.6均等地结合DNA-RNA杂聚物和聚(I)-聚（dC），但是要达到相似的结合程度，需要100倍更高水平的聚(A)-聚（dT）。克隆S9.6不结合单链DNA、双链DNA和RNA以及核糖体RNA（Boguslawski，S.J.，et al.（1986）.J. Immunol Methods.89（1）:123-130）。

目标DNA-RNA异源双链体（R环）结构不是序列或物种特异性的。

形式：纯化

纯化的小鼠IgG2aκ，溶于含0.1 M Tris-甘氨酸（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.05%叠氮化钠的缓冲液中。

纯化蛋白G。

自接收之日起，在2-8°C下可稳定保存1年。

通过免疫细胞化学在HeLa细胞中进行评估。

免疫细胞化学分析：该抗体以1:50稀释度在4%多聚甲醛固定的0.3% Triton X-100透性化HeLa细胞中免疫定位了核和线粒体DNA-RNA杂交体。

浓度：请参考特定批次的数据表。

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