抗-N3-磷酸组氨酸（3-pHis）抗体，克隆SC56-2

磷酸化在调节蛋白质活性和细胞中各种细胞信号事件中起重要作用。受磷酸组氨酸（pHis）检测工具的限制，大多数研究集中在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化上。组氨酸磷酸化可发生在咪唑环的N1（1-pHis）或N3（3-pHis）处。含有1-pHis和3-pHis的稳定的磷酸化三唑基丙氨酸类似物（1-pTza和3-pTza）的肽的开发允许产生用于研究信号事件中组氨酸N1和N3磷酸化的抗体。越来越多的证据表明His激酶与癌症和肿瘤转移有关，第一个鉴定出的转移抑制基因是两种已知的哺乳动物His激酶Nm23-H1（也称为NME1、嘧啶核苷二磷酸激酶或NDPK-A）之一。Nm23-H1/Nme1和密切相关的Nm23-H2（Nme2/NDPK-B）通过1-pHis酶中间体催化磷酸盐从ATP转移到核苷二磷酸(NDP)上。Nm23-H1/-H2也具有His激酶活性，可将磷酸盐从活性位点pHis转移到目标蛋白中的His上。诸如磷酸甘油酸变位酶(PGAM)、琥珀酰辅酶A合酶(SCS)和ATP柠檬酸裂合酶(ACL)之类的代谢酶也使用pHis作为酶中间体。与NME1/2不同，PGAM使用3-pHis作为酶中间体。除真核生物外，组氨酸磷酸化在趋化性涉及的细菌“两组分”信号传导途径中也有充分的文献记载，尽管磷酸盐从受体/传感器蛋白中形成的pHis转移到受体反应调节蛋白的Asp残基上，并且受体/传感器蛋白本质上起天冬氨酸激酶的作用。

根据组氨酸磷酸化蛋白而变化。

抗N3-磷酸组氨酸（3-pHis）抗体（克隆SC56-2）是一种异构体特异性单克隆抗体，可特异性检测N3位点磷酸化的组氨酸。该纯化的mAb得到了已发布数据的支持，该数据证明了其在蛋白质印迹和斑点印迹应用中的性能。

斑点印迹分析：一个代表性批次检测到含有3-pTza磷酸组氨酸类似物的肽，但未检测到仅含有磷酸化酪氨酸的肽。克隆SC56-2对基于NM23-H1/NME1 3-pHis118和PGAM 3-pHis11序列的3-pTza肽反应性最高，对基于ACLY 3-pHis760、组蛋白H4 3-pHis18或Kca3.1 3-pHis358序列的3-pTza肽反应性最低，而对基于GNB1 3-pHis266的3-pTza肽反应性最低（Fuhs, S.R.，et al.（2015）.Cell.162（1）:198-210）。

蛋白质印迹分析：使用克隆SC56-2杂交瘤培养物上清液对来自转化大肠杆菌的裂解物中外源表达的人PGAM GST融合蛋白的热敏组氨酸N3-磷酸化（3-pHis）进行蛋白质印迹分析（Fuhs, S.R.，et al.（2015）.Cell.162（1）:198-210）。

注意: 在检测磷酸组氨酸之前，请勿加热样品。组氨酸磷酸化对热和酸不稳定。为生成特异性试验的阴性对照，可将等分样品在95ºC下加热10-15分钟，以逆转组氨酸磷酸化。或者，可以将等分试样样品在酸化pH值和37ºC下孵育15分钟，以减少组氨酸的磷酸化。孵育前用25 µL 1 M HCl酸化各100 µL样品，然后在磷酸组氨酸检测前用25 µL 1 M NaOH中和。

目标修饰不是物种特异性的。

选择性检测咪唑环N3位点组氨酸磷酸化的蛋白（3-pHis），而非1-pHis。

形式：纯化

通过PGAM催化的2,3-DPG降解反应的蛋白质印迹法进行评估。

蛋白质印迹分析：0.52 µg/mL该抗体在5 µg等分PGAM催化的2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）降解反应中检测到重组人磷酸甘油酸变位酶(PGAM)和N3-磷酸组氨酸（3-pHis）。

浓度：请参考特定批次的数据表。