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分子克隆与蛋白质表达

图中的图表说明了蛋白质的表达过程,从表达质粒开始,到形成表型,包括在细胞核中转录、翻译和定位等步骤,最后到纯化。该图采用彩色编码,粉色代表整个过程,黄色突出显示细胞核。它包括 "表达质粒"、"细胞核"、"转录"、"mRNA"、"翻译"、"表型"、"定位 "和 "纯化 "等标签。

分子克隆的目的是将感兴趣基因(GOI)插入到质粒载体中,质粒载体是一个环形的DNA片段,其中包含各种元素,便于克隆、克隆选择和蛋白质表达。研究人员通常使用 DNA 限制酶和连接酶将 GOI 插入表达载体的框架内,以便随后表达蛋白质。然后将该载体插入细胞,使其表达由 GOI 编码的蛋白质,或使用无细胞蛋白质合成系统完成蛋白质表达。

一旦表达了蛋白质,就可以研究蛋白质的功能,因为它会影响细胞信号、形态或细胞内的其他方面。此外,还可以大量表达、纯化蛋白质,并将其用于多种下游应用。如需了解更多信息,请浏览我们全面提供的可靠试剂和资源,这些试剂和资源可用于克隆和amp;昆虫、细菌和哺乳动物蛋白质表达系统的表达工作流程。


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限制酶和 DNA 修饰酶

在分子克隆中,研究人员通常使用两种酶 - 限制酶用于切割 DNA,修饰酶用于进行核酸修饰,通常在连接步骤之前使用。请浏览我们种类繁多的限制性酶和其他修饰酶,如碱性磷酸酶、蛋白酶、T7 RNA 聚合酶、核糖核酸酶 A 和 T4 DNA 连接酶,以满足您的所有研究需要。

使用 CMV Promoters 和 FLAG® Tag 技术的无细胞表达系统和表达载体

我们的克隆和表达产品组合通过提供一系列具有简化协议和克隆试剂盒的多功能载体,使基因工程的成本更低,效率更高。您可以从我们广泛的克隆和表达系统中进行选择,包括我们的无细胞蛋白质合成或表达系统,如 新一代无细胞蛋白质合成或表达系统。>新一代无细胞蛋白表达试剂盒(小麦胚芽) 和ALiCE®试剂盒。此外,您还可以发现细菌和哺乳动物 FLAG® 表达载体,用于在瞬时或稳定转染系统中进行质膜周围或细胞质表达,并自信地表达您的 FLAG® 或 FLAG® 基因。sup>® 或 3X FLAG® 序列的 N 端或 C 端,必要时可通过肠激酶 (Ek) 的裂解位点去除融合标签。

Novagen® pET系统、SnapFast™载体,Simplicon™ 载体和 UCOE™ 蛋白质表达系统

所有大肠杆菌表达载体和昆虫表达载体均可用于大肠杆菌表达系统。大肠杆菌表达载体和昆虫表达载体都具有氨苄西林抗性,便于选择阳性转化子。了解 Novagen® pET 系统,它是在细菌表达中克隆和表达重组蛋白的黄金标准。SnapFast™ 系列载体由牛津基因公司(Oxford Genetics)设计,提供了一种快速简便的方案,允许使用 SnapFast™ 切割位点将 GOI 从一种载体转移到另一种载体,生成的载体与昆虫、酵母、细菌和amp;哺乳动物表达系统兼容。利用我们的 Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE™) 表达载体技术,您可以在不到 30 天的时间内,在稳定转染的哺乳动物细胞中获得克级蛋白质。UCOE™ 表达技术可防止转基因沉默,并提供持续、稳定和高水平的基因表达,比传统载体高出 20 倍,与染色体整合位点无关。Simplicon™ 体内蛋白质表达系统是一种非基因组整合、可调谐和合成的基于 RNA 的自我复制表达系统,可在转染人体细胞中产生即时、高持续的多基因蛋白质表达,而没有基因组整合的风险。

细菌和酵母转化试剂和资源

细菌转化是使用热休克和电穿孔等方法将外来 DNA 植入细菌的过程。我们的合格细胞组合经过精心设计,即使是最具挑战性的重组蛋白,也能获得最佳的蛋白质表达效果。请浏览我们的《合格细胞选择指南》,从各种新型细菌合格细胞中选择适合蛋白质表达、常规或高难度克隆以及文库生成等各种应用的细胞。此外,在酿酒酵母中表达重组蛋白有很多优点,如方案简单、使用基本试剂和可扩展性。了解作为蛋白质表达工作流程一部分的酵母转化产品。我们的 NovaBlue® 能力细胞针对转染效率和质粒保存进行了优化,支持卓越的文库制备和质粒稳定性。此外,Novagen®能力细胞还可促进蛋白质的正确折叠、提高溶解度或表达细胞毒性蛋白质。最受欢迎的品牌包括 Rosetta™、Origami™ 和 Overnight Express™ 系统。


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