Merck
CN

CAS9P

Sigma-Aldrich

Cas9 质粒

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NACRES:
NA.51

重组

expressed in E. coli

质量水平

包装

vial of 50 μL

浓度

20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)

启动子

Promoter name: CMV

selection

kanamycin

运输

dry ice

储存温度

−20°C

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一般描述

Cas9表达质粒使用CMV启动子实现Cas9强瞬时表达。您可以使用MluI和NheI酶切将CMV替换为其它启动子。而且还可使用XbaI酶切将Cas9表达质粒线性化,以实现基于T7的mRNA表达。

应用

功能性基因组学/靶点验证
  • 在多种细胞系中进行基因敲除
  • 对不适合于RNAi的基因进行完全敲除
  • 建立基因敲入细胞系,将启动子、融合标签或报告基因整合到内源性基因中

组分

1管含1µg 的Cas9质粒。

请注意,该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。

原理

CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件,即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA),该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9核酸内切酶可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。

外形

Sigma Cas9 质粒DNA的产品形式是浓度为20ng/μl的50μl溶液。

制备说明

Sigma CRISPR质粒产品为小量提取包装,可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果,我们建议在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。

其他说明

为了介导DNA双链断裂,必须与U6-gRNA质粒一起使用。

文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)

储存分类代码

10 - Combustible liquids

WGK

nwg

闪点(°F)

Not applicable

闪点(°C)

Not applicable

法规信息

常规特殊物品

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货号
-
25G
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MMYOMAG-74K-13

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Yan Wang et al.
Reproduction (Cambridge, England), 160(3), 353-365 (2020-06-11)
In this study, we investigated a gene-edited (Zp2MT/MT) rat model of infertility caused by the failure to express the zona pellucida glycoprotein 2 (ZP2) due to the significant reduction of mRNA amount. We examined the defects in the zona pellucida

实验方案

Learn about CRISPR Cas9, what it is and how it works. CRISPR is a new, affordable genome editing tool enabling access to genome editing for all.

了解CRISPR Cas9、定义和工作原理。CRISPR是一种全新、实惠的基因组编辑工具,可让所有人掌握基因组编辑。

使用CRISPR/Cas9系统生成正确的转基因小鼠需要充分理解正在测试的假设。了解如何创建成功的小鼠模型项目。

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Sigma-Aldrich® Advanced Genomics is the leading provider of gene editing and silencing technologies including CRISPR, Cas9, synthetic guide RNA (sgRNA), and Zinc Finger Nuclease (ZFN).

默克Sigma-Aldrich® Advanced Genomics提供了一整套用于基因敲减和过表达实验的优化CRISPRi和CRISPRa文库目前可提供CRISPRi和SAM CRISPRa混合的慢病毒文库,也可根据您的特定需求提供定制产品。

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