DNA连接酶 来源于 T4-感染的大肠杆菌

适用于：

• 平端和粘性DNA片段的连接
• 克隆载体和限制性插入片段的连接
• 双链DNA和RNA或DNA/RNA杂合体中的缺口补平
• 通过桥连寡核苷酸接头来偶联RNA单链

T4 DNA连接酶可在双链体DNA的相邻多核苷酸的末端之间形成能量依赖性的磷酸二酯键。连接反应需要ATP作为辅助因子。平末端片段的连接需要更高的酶浓度并可通过在反应混合物中使用PEG来促进。该酶需要3′羟基和5′磷酸基用于连接。可通过用碱性磷酸酶进行去磷酸化来防止载体DNA的自连。T4连接酶在DNA和RNA缺口的修复中可发挥积极作用。

T4 DNA连接酶以溶于20 mM Tris-HCl（pH 7.5），50 mM KCl，1 mM DTT和50%（v/v）甘油的溶液形式提供。

一个Weiss单位的定义是在37℃ 下，在20分钟内催化1 nmol的P32从焦磷酸盐交换至ATP作为Norit可吸收物质所需的酶量。

T4 DNA连接酶可通过在65 °C加热10分钟灭活。