一般描述
经过优化的WTA2，可对福尔马林固定的石蜡包埋样品（FFPE）和其他受损或降解样本中的RNA进行扩增。全转录组扩增（WTA）技术可在4小时内对ng级的总RNA进行无3′偏差的代表性扩增。扩增产物适用于qPCR、微阵列分析和克隆等应用。WTA2试剂盒含有cDNA文库扩增所需的聚合酶。
应用
完整全转录组扩增试剂盒用于：
- 建立过程控制深度测序同时分析猪粪便中DNA和RNA病毒的实验方案。
- 反转录和cDNA扩增
- 使用免疫捕获PPV颗粒释放的基因组RNA来合成和扩增cDNA库
- 核酸制备和深度测序（提取的核酸随机引物用于cDNA合成）
适于各种下游应用，包括：
- qPCR
- 微阵列分析
- 克隆
特点和优势
- 在4小时内实现高达10,000x的扩增，并且手动操作时间低于30分钟
- 仅需20 pg的总RNA模板，即可扩增出适用于微阵列分析的cDNA
- 含有cDNA扩增所需的所有元件
- 实现对表达基因和外显子的线性扩增，无3′或5′偏差
- 有效扩增单细胞或小量RNA，包括来自动物、植物或微生物的mRNA和总RNA。
原理
WTA2过程包括2个步骤。第一步，使用由拟随机3′端和通用5′端组成的非自身互补引物对样品RNA进行逆转录。在该过程中，被取代的单链将作为引物退火和延伸的新模板。所得OmniPlex cDNA文库由以通用末端序列为侧翼序列、含100-1000个碱基的随机重叠片段组成。第二步，使用WTA2聚合酶和通用末端引物对cDNA文库进行PCR扩增，生成WTA2产物。
储存分类代码
10 - Combustible liquids
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