酶联免疫吸附测定(ELISA)
ELISA通常在多孔微孔板中进行,是一种分子生物学检测方法,常用于检测和定量各种分子,包括肽、蛋白质和抗体。此类检测可在pg/mL水平检测目标分子,对于基础研究和疾病研究的应用需求都至关重要。
ELISA检测:抗体-抗原相互作用
ELISA的基本分子组分通常包括与酶标记的抗体、固定的目标分子以及检测底物。决定ELISA实验成功与否以及所获数据质量的关键因素,取决于抗体-抗原相互作用的亲和力和特异性。抗原-抗体相互作用受多种因素影响,包括pH值、温度和离子强度。
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ELISA检测格式
采用直接检测法的ELISA需要将抗原固定在检测板表面(可直接结合或通过捕获抗体间接结合),随后加入与酶标记的抗原特异性一抗,最后加入检测底物。
更常用的间接检测模式则同时包含未标记的一抗,随后使用特异性识别该一抗的酶标记二抗。由于酶标记成分仅存在于二抗上,间接检测能提高与目标抗原的免疫反应性。
除了直接和间接检测方法外,捕获法或“夹心”法还使用一种额外的抗原捕获抗体,该抗体首先附着在微孔板表面,随后同时使用一抗和酶标记的二抗,这与前述的间接法类似。
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