聚合酶链式反应 (PCR) 应用

反转录酶 PCR (RT-PCR)

RT-PCR 或反转录酶 PCR 是标准 PCR 技术的一种变体，涉及从极少量样本中扩增特定 mRNA。它省去了传统克隆技术所需的繁琐的 mRNA 纯化过程。在 RT-PCR 技术中，除了标准的 PCR 试剂外，还要使用逆转录酶和 RNA 样本。将反应混合物加热到 37 ˚C，反转录酶就能从 RNA 样品中产生互补的 cDNA 拷贝。然后，cDNA 与引物之一退火，形成第一链。随后进行标准 PCR，最终生成 dsDNA。

热启动 PCR

热启动 PCR 是一种抑制热启动 Taq 聚合酶或在反应设置过程中加入修饰 dNTPs 的技术，直到发生热激活步骤。有多种方法可以抑制热启动聚合酶的活性，包括化学修饰、抗体介导和适配体介导的方法。

用于长而准确目标扩增的终点 PCR

终点 PCR 通常用于检测反应完成时目标的存在和相对丰度。标准 PCR 生成的序列长度有限，约为 5 kb，这在一定程度上是由于加入了提供 "校对 "活性的额外因子。长而准（LA）PCR 使用了第二种带有 3′→5′ 外切酶的恒温聚合酶来修复末端核苷酸错位，从而大大提高了保真度，并能扩增长度达 40 kb 的 DNA 目标。