巨噬细胞是外周血单个核细胞分化于组织中的专职吞噬细胞和抗原呈递细胞(APC)。在固有免疫和适应性免疫中执行重要的活化和调节功能。1激活的巨噬细胞通常可分为两种表型,M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。经典激活的M1型巨噬细胞(classically activated macrophage, CAM)可作为免疫效应细胞,发挥急性促炎作用。具有强抗菌作用,可产生大量的淋巴因子。2替代激活的M2型巨噬细胞(alternatively activatedmacrophage, AAM)则具有抗炎作用,至少可分为3种亚型。这些亚型各自执行不同的功能,包括免疫调节、耐受维持和组织修复/创伤愈合。1,2实际上,巨噬细胞在面对各种内源和外源刺激时具有高度的可塑性,初始的M1/M2极化过程可以进行转化2,例如,在特定条件下,M2极化的巨噬细胞可转化为M1激活状态。
从组织材料中获取的人原代巨噬细胞数量偏少,并且无法体外扩增。此外,普遍认为组织来源的巨噬细胞通常呈现明显的表型异质性。有鉴于此,改为获取单核源性巨噬细胞(Monocyte-derived macrophage)是不错的选择,首先可大量获取人血单个核细胞(PBMC),接着通过体外分化获得巨噬细胞。PromoCell巨噬细胞生成培养基专用于将PBMC直接高效分化为高纯度的M1或M2型巨噬细胞。PromoCell巨噬细胞生成培养基DXF成分确定、不含血清和异源物质,可创造不含任何动物源刺激的受控培养环境,尤为适合单核细胞和巨噬细胞这类易于激活的免疫细胞。这款培养基有别于FBS,不含有不确定的潜在有害成分,可实现标准化和受控的巨噬细胞分化。用于单核细胞体外分化时,PromoCell M1-巨噬细胞生成培养基DXF(C-28055,含有GM-CSF)可生成CD68+/ CD80+/CD163-M1样极化巨噬细胞,M2-巨噬细胞生成培养基DXF(C-28056,含有M-CSF)可生成CD68+/CD80-/CD163+M2样极化巨噬细胞。巨噬细胞基础培养基DXF(C-28057)不含细胞因子,由用户自行选择适合的补充剂。用户可根据需要选择性地激活和极化特定亚型的M1/M2极化巨噬细胞。
图 1.PromoCell M1/M2巨噬细胞生成培养基DXF培养方案概览。
图 2.人PBMC来源M1巨噬细胞的形态和吞噬活性。A)PromoCell巨噬细胞生成培养基DXF接种24小时后,M1巨噬细胞的相差显微(Phase bright,明反差)图像。B) PromoCell冻存M1巨噬细胞吞噬大量荧光标记大肠杆菌。
图 3.人PBMC来源M2巨噬细胞的形态和吞噬活性。A)PromoCell巨噬细胞生成培养基DXF接种24小时后,M2巨噬细胞的相差显微图像。B) PromoCell冻存M2巨噬细胞吞噬大量荧光标记大肠杆菌。
图 4.PromoCell巨噬细胞生成培养基DXF培养第10天的M1和M2巨噬细胞的流式细胞分析。将新鲜的外周血单个核细胞(PBMCs)接种在单核细胞贴壁培养基中。获得的纯化单核细胞分化10天(不进行选做的激活步骤)。经表型标志物分析,M1巨噬细胞呈CD68+(99%阳性)和CD80+(83%阳性),M2巨噬细胞呈CD68+(99%阳性)和CD163+(95%阳性)。
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