低压液相色谱法

低压液相色谱(LPLC)是一种分析技术,利用低压驱动流动相通过装有固定相的色谱柱,通过差异分配法分离复杂混合物。该技术最初采用开放式色谱柱,依靠重力推动样品通过填料床,因此也被称为"开放式液相色谱"。 不同模式的LPLC技术能根据化合物的化学特性(如分子大小、电荷性质或亲和力)实现精准高效的分离纯化。
因其非破坏性制备特性,该技术主要用于研究蛋白质、肽类及单克隆抗体等生物分子。LPLC通常能保留样品以供后续研究。 LPLC还具备诸多优势:结构设计简洁、虹吸能力强、仪器配置要求低(仅需检测器、低压泵和分馏收集器)。其多功能性使其在制药、生物技术、食品饮料、环境监测及科研领域不可或缺。此外,通过采用低压操作和减少溶剂用量,LPLC符合绿色化学原则。
精选分类
吸附色谱法
又称液固色谱法,吸附色谱通过在载体(固定相)表面吸附和脱附化学物质来实现分离。吸附剂构成固定相,溶质通过范德华力和空间位阻作用与其结合。由于吸附位点通常位于固定相外表面,因此固定相通常采用相对微小的颗粒。 常见吸附剂包括:二氧化硅、氧化铝、活性炭、氟硅酸铝、聚酰胺、硅藻土及硅藻土。
分配色谱
分配色谱通过在两种不相溶液体间分配组分实现分离。其中一种液体作为流动相,另一种则固定在固体载体上作为固定相。常用的固体载体材料包括硅胶、硅藻土、纤维素、聚四氟乙烯(PTFE)和聚苯乙烯。惰性固体载体为液体固定相提供了巨大表面积。
亲和色谱
亲和色谱通过选择性可逆相互作用实现组分分离,例如抗体-抗原、酶-底物或激素-受体对,其中一种相互作用剂作为固定相。亲和配体是固定在固体载体(如丙烯酸珠、琼脂糖、Toyopearl树脂)上的相互作用物种,构成亲和色谱柱的固定相。
凝胶过滤色谱
又称尺寸排阻色谱法,通过分子尺寸差异实现分离,适用于不同大小的蛋白质及寡聚体形式。固定相为具有特定孔径的交联树脂珠基质。凝胶过滤色谱柱填充聚丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖或其混合物,通过柱内填料颗粒的孔隙空间部分或完全通透,实现对小分子分析物的分离。
疏水作用色谱(HIC)
疏水作用色谱(HIC)基于生物分子表面疏水性差异进行分离。其原理是色谱柱树脂上连接的非极性疏水基团(如丁基、辛基或苯基)与生物分子上的疏水基团发生相互作用。该技术采用较温和的变性条件和介质,在保持蛋白质生物活性的同时实现分离,因此被广泛应用于蛋白质分离领域。
离子交换色谱法(IEX)
离子交换色谱依据分子净表面电荷差异实现分离。其基质表面(如纤维素、二氧化硅或苯乙烯-二乙烯苯)通过共价键连接带电官能团。 树脂上固定化的离子交换基团与带相反电荷的分子相互作用。在阳离子交换色谱中,流动相中的正电荷物质与负电荷离子交换树脂结合;在阴离子交换色谱中,流动相中的负电荷物质则与离子交换树脂上的正电荷结合。
低压液相色谱系统
低压液相色谱(LPLC)系统通常包含:填充固定相的色谱柱用于分离;以可控流速输送流动相的泵;以及检测洗脱液出柱状态的检测器。
该系统还配备进样装置,用于将样品引入流动相流中,确保精确且可重复的样品注入。部分配置包含分馏收集器,用于收集分离后的组分以供后续分析。
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