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HPLC缓冲液

缓冲盐晶体堆

缓冲液是弱酸与其共轭碱、或者弱碱与其共轭酸的溶液。在分析化学应用中,如果样品包含酸性或碱性官能团,反相高效液相色谱(RP-HPLC)通常会使用缓冲液。这类缓冲液可减轻氢/水合氢和氢氧根离子的影响,从而降低pH波动。


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流动相缓冲液

基于缓冲类型、离子强度和pH正确选择缓冲液,是离子分析物RP-HPLC方法开发最关键的步骤。RP-HPLC中离子分析物的保留率主要受流动相pH影响。因此,RP-HPLC流动相pH控制是确保分析物有效分离最重要的参数之一。

二氧化硅类色谱柱反相分离常用pH值范围为2到8。此外,由于缓冲液在其pKa值下的pH控制效果最佳,故其pKa必须接近所需的pH值。一个经验法则是,最好选择pKa值比所需流动相pH值小2个单位的缓冲液。我们提供各种pH范围广泛的HPLC级缓冲液,可满足所有实验室色谱要求。

HPLC缓冲液选择考量因素

化学纯度

HPLC实验所用流动相添加剂(缓冲液、盐、酸和碱)及有机溶剂质量必须适合检测器灵敏度和洗脱方案。为实现理想的色谱分离效果,建议使用高质量溶剂和试剂。

化学相容性

必须根据色谱柱外壳材料和固定相性质选择缓冲液组成及流动相pH值,避免损坏色谱柱硬件和柱床。

缓冲液溶解性

缓冲液最好完全溶于水且不会沉淀。将缓冲液与有机溶剂混合时,必须谨慎选择缓冲液浓度,避免因浓度过高而形成沉淀。否则可能造成泵运行问题,引起HPLC色谱柱堵塞。

缓冲强度

与固定相相互作用弱的洗脱液今可从色谱柱上洗脱弱吸附分析物,而强相互作用洗脱液则可洗脱强吸附样品分子。不同溶剂的洗脱或溶剂强度主要取决于所用固定相的类型。除洗脱强度之外,缓冲液粘度和紫外线吸收率也对HPLC分析适用性存在重要影响。