缓冲液:10至50 mM磷酸钠,150 mM氯化钠,pH 7.0至7.4;或选择用来在下一步骤前存储或溶解样品的缓冲液。
使用150 mM氯化钠或具有相同离子强度的缓冲液,以避免pH依赖性离子与基质的相互作用。在非常低的离子强度下,基质上存在少量带负电荷的基团可导致碱性蛋白质的阻滞。
该过程需确保样品应完全溶解。离心或过滤以去除颗粒物(附录3)。始终使用脱气缓冲液并在运行期间保持恒定温度,以避免将空气引入层析柱。
在层析系统上设置适当的压力限制,以避免损坏层析柱填料。
首次使用或长期储存后
应通过确定每米理论塔板数和峰对称性,定期检查层析柱性能。
请确保不超过层析柱的压力限制并考虑限制流速(表1.3)。当在低温下工作时(如在冷室中),或当柱子与20%乙醇或其他粘稠溶液一起使用时,这点尤其重要。暴露在4 °C至40 °C范围之外的温度会对填充床的效率产生负面影响,并且层析柱可能需要重新灌柱。
表2.3.在使用预装Superdex Increase、Superdex的层析柱,或装有制备级Superdex 填料的HiLoad层析柱时,不同阶段推荐的流速室温下的流速
†Superdex 200 Increase 5/150 GL的流速为0.13 mL/min。
清洁
如果缓冲液含有表面活性剂,则可能需要进一步的平衡。
建议每10至20次分离后进行常规清洗,但清洗频率还取决于所用样品的性质。
去除严重污染
对于极端的污染情况,请查看产品随附的说明。
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