明胶是胶原蛋白的一种分子衍生物,通过对来自牛皮的胶原蛋白进行碱性消化而合成。明胶是一种水状胶体,富含甘氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸,具有结构稳定性。明胶可为细胞培养提供理想的细胞附着基质。最适浓度取决于细胞类型和研究对象。
明胶包被前重要注意事项
- 确保细胞健康且数量充裕。
- 明胶溶液需要在包被前在37°C下完全液化。
- 明胶溶液可4-8°C无限期保存;高温会导致水解和完整性损失。
- 常用表面覆盖浓度为100 – 200 µg/cm2。表面覆盖浓度可能因培养细胞而异。必须确定每种细胞系和应用的最佳附着条件。
- 包被之后切勿过度干燥,否则会破坏明胶结构并影响细胞附着。
用于细胞培养的明胶包被实验方案
- 将明胶溶解在组织培养级水中,制备2%(w / v)溶液。
- 在121°C、15 psi下高压灭菌30分钟。
- 5-10 µL明胶溶液/cm2(即100-200 µg/cm2)包被培养表面。
- 在加入细胞或培养基之前至少干燥2小时。
- 或者,也可使用明胶溶液(货号G1393)直接包被培养皿。