间充质干细胞的分离
人间充质干细胞的扩增
人间充质干细胞的分化
常问问题解答
间充质干细胞(MSC)具有多谱系分化的能力,产生多种间充质表型,例如成骨细胞(骨)、脂肪细胞(脂肪)和软骨细胞(软骨)。干细胞疗法具有实现下一代未来医学突破的巨大前景。在这方面,多能祖细胞,例如hMSC,由于其能够分化成各种细胞类型的能力以及其免疫调节特性,而引起了很高的临床兴趣。总之,这些特性使得能够同种异体使用hMSC,从而使它们成为商业治疗开发中颇有吸引力的目标。下面将给出干细胞培养中正确分离、扩增和分化MSC的实验方案的详细步骤。
目前已可从多种组织中分离出间充质干细胞,包括人骨髓、脂肪组织、脐带和牙髓。以下是一个简单的通用实验方案,可用于从各种组织来源获得MSC。
注意:MSC种群因供体而异,可能需要进一步优化。
组织培养用塑料培养板或玻璃器皿应该涂上0.1%明胶,如下如述:
图 1.解冻后一天(A)和两天(B)后的人间充质干细胞的阶段对比图。注意纺锤形、成纤维细胞样的形态。在传代之前,细胞应该达到约80%汇合。
图 2.用人间充质干细胞表征试剂盒中提供的抗体培养的人骨髓来源的间充质干细胞的ICC染色。人间充质干细胞表达H-CAM(CD44)(A,CBL154;1/500稀释)、THY-1(CD90)(B,CBL415;1/500稀释)和STRO-1(C,MAB4315:1/500稀释)。用DAPI(蓝色)显示的细胞核。人间充质干细胞中未观察到造血干细胞标志物CD19(MAB1794)和CD14(MAB1219)和内皮标志物CD146(MAB16985)的表达(数据未显示)。
取用一个人纤连蛋白、20 μg/mL(FC010)或0.1%明胶(ES-006-B) 包被的48孔组织培养板,在0.5 ml常规MSC生长培养基 (SCM015 or SCM045)中接种20K细胞/孔。孵育过夜后,用OsteoMAX-XF™分化培养基 (SCM121)更换培养基。每2-3天更换一次培养基,共计14-21天。茜素红(TMS-008)染色的骨细胞将在第7天左右开始形成,在第14天左右达到最大表达。
取用一24孔组织培养板,在1 ml常规MSC生长培养基 (SCM015 or SCM045)中接种60K细胞/孔。孵育过夜后,用AdipoMAX™分化培养基(SCM122)更换培养基。每2-3天更换一次培养基,共计14-21天。每2-3天更换一次培养基,共计14-21天。油红-O (O1391)染色的脂肪细胞将在第14天左右开始形成,在第21天左右达到最大表达。
可以使用聚集体中细胞的三维微团培养物诱导间充质干细胞分化成软骨细胞。
图 3.用油红-O(脂肪细胞)、茜素红(骨细胞)、番红-O(软骨细胞)和阿尔新蓝(软骨细胞)染色分化的人间充质干细胞培养物。
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