细胞活力和增殖检测

• DNA合成增殖检测
• 代谢增殖检测
• 发光细胞活力检测
• 荧光染料增殖检测
• 3D细胞培养- 活/死/总细胞三重染色
• 台盼蓝细胞计数

介绍

可测量细胞增殖、细胞活力和细胞毒性的检测常被用于监测用各种刺激物处理后培养物中细胞的应答和健康状况。检测方法的正确选择取决于所用的细胞数、类型以及预期的结果。细胞增殖的检测可以监测一段时间内的细胞数、细胞分裂的次数、代谢活性或DNA合成。使用诸如台盼蓝或钙黄绿素-AM等活性染料进行的细胞计数可以提供增殖率以及存活细胞的百分比。

细胞活力和增殖检测概览

DNA合成增殖检测

BrdU细胞增殖检测

细胞增殖可通过监测放射性同位素[3H]-胸苷向细胞DNA中的掺入并进行放射自显影而进行研究。或者，也可以使用5-溴-2'-脱氧尿苷（BrdU检测）来代替胸苷。DNA中掺入了BrdU的细胞可通过使用针对BrdU的单克隆抗体以及偶联了酶或荧光的二抗而被轻松检测到。

EdU增殖检测

Baseclick EdU增殖检测为复制中DNA的荧光检测提供了一种有效的方法。修饰后的核苷EdU被添加到活细胞中并掺入至复制中的DNA中。引入Cu的点击化学可实现将荧光探针与EdU快速结合。这为正在增殖的细胞提供了一种定量的监测方法。这些检测可提供多种形式，用于显微镜成像、流式细胞分析、高通量筛选以及体内实验。可提供激发峰在488、555、594和647的四种不同荧光探针用于与其他荧光探针的多重检测能力。

代谢增殖检测

可测量代谢活性的检测可适用于增殖、活力和细胞毒性的分析。仅在代谢活跃的细胞中发生将四唑盐如MTT, XTT, 和 WST-1还原为有色的甲臜化合物或刃天青的生物还原。主动增殖细胞会提高它们的代谢活性，而暴露于毒素的细胞活性会降低。

MTT细胞增殖检测

MTT（3- [4,5-二甲基噻唑-2-基] -2,5-二苯基溴化四唑;噻唑蓝）是一种水溶性四唑盐，在缺少酚红的培养基或盐溶液中制备时会生成淡黄色的溶液。溶解的MTT会因为脱氢酶对四唑环的切割而被转化为不溶的紫色甲臜。该水不溶性的甲臜可使用异丙醇或其他溶剂进行溶解，并使用吸光度作为转化染料浓度的函数而通过分光光度法对溶解的物质进行测量。

XTT细胞增殖检测

与XTT相反，XTT的切割产物是溶于水的；因此不需要溶解步骤。四唑盐XTT会通过一个复杂的细胞机制而被切割成甲臜。该生物还原仅发生在活细胞内，并与通过糖酵解的NAD(P)H生成相关。所形成的甲臜染料量与培养物中代谢活跃细胞的数量直接相关。

WST-1细胞增殖检测

稳定的四唑盐WST-1会通过一种主要发生在细胞表面的复杂细胞机制而被切割成一种可溶性的甲臜。该生物还原主要依赖于发生在活细胞内的糖酵解NAD(P)H生成。所形成的甲臜染料量与培养物中代谢活跃细胞的数量直接相关。

实验方法指南：用于细胞活力和增殖的WST-1检测。实验方法、FAQ和疑难排查

 发光细胞活力检测

由于ATP是代谢活跃细胞的一种指示剂，因此可根据可用的ATP量来评估活细胞的数量。ATP细胞活力萤光素酶检测可提供一种高度灵敏的均相检测用于定量细胞培养物中的ATP。该试剂盒利用萤火虫萤光素酶氧化D-萤光素，并通过所生成的光来评估细胞培养物中可用的ATP量。这种灵敏的检测方法仅需要将ATP检测混合物直接添加到在含血清培养基中培养的细胞中。无需细胞洗涤、培养基去除或多步移液。该试剂盒足够灵敏到用于检测单细胞细胞或0.01皮摩尔的ATP。所产生的信号具有六个数量级的线性度。通过将ATP的量与活细胞的数量相关联，该检测具有广泛的应用范围，包括从确定活细胞的数量到细胞增殖再到细胞毒性。

3D细胞培养- 活/死/总细胞三重染色

细胞活力成像试剂盒是一种三色检测，可与2D和3D细胞培养物一起使用用于对活细胞（钙黄绿素-AM）、死细胞（碘化丙啶/ PI）以及总细胞（Hoechst 33342）同时进行荧光染色。

• 钙黄绿素-AM会在结合钙上发出绿色荧光，依赖于仅在具有代谢活性的活细胞中存在的酯酶活性。
• 碘化丙啶（PI）是一种会被活细胞的膜排除在外的核染料，但它会穿过受损的死细胞膜并插入DNA以发出强烈的红色荧光。
• Hoechst 33342是一种具有低细胞毒性的DNA染料。它会发出蓝色荧光并用于总细胞计数的指示剂。