细胞活力和增殖测定

• DNA Synthesis Proliferation Assays
• 代谢增殖测定
• Luminescent Cell Viability Assays
• Fluorescent Dye Proliferation Assays<
• 三维细胞培养--活/死/总细胞三重染色
• Trypan蓝细胞计数

细胞免疫测定

简介

测量细胞增殖、细胞活力和细胞毒性的检测方法常用于监测培养细胞在受到各种刺激后的反应和健康状况。检测方法的正确选择取决于所用细胞的数量和类型以及预期结果。细胞增殖检测可监测一段时间内的细胞数量、细胞分裂次数、新陈代谢活动或 DNA 合成。使用存活率染料（如胰蓝或钙黄绿素-AM）进行的细胞计数既能提供增殖率，也能提供存活细胞的百分比。

DNA 合成增殖测定

BrdU 细胞增殖测定

细胞增殖可通过监测放射性同位素[3H]-胸苷在细胞 DNA 中的掺入情况，然后进行自显影来研究。另外，也可以用 5-溴-2′-脱氧尿苷（BrdU 检测法）代替胸苷。使用抗 BrdU 的单克隆抗体和酶或萤光色素结合的第二抗体，可以很容易地检测到将 BrdU 结合到 DNA 中的细胞。

EdU 增殖测定

Baseclick EdU 增殖测定 提供了一种荧光检测复制 DNA 的有效方法。将修饰的核苷 EdU 加入活细胞，并与复制的 DNA 结合。铜诱导的点击化学反应可使荧光探针快速附着到 EdU 上。这提供了一种定量监测增殖细胞的方法。该检测方法有多种形式，可用于显微成像、流式细胞仪、高通量筛选和体内实验。四种不同的荧光探针的激发峰值分别为 488、555、594 和 647，可与其他荧光探针进行复用。

代谢增殖测定

测定代谢活动的方法适用于分析增殖、活力和细胞毒性。四唑盐的还原如 MTT、 XTT 和 WST-1 仅在代谢活跃的细胞中才会形成有色的甲臢化合物或发生利马唑啉的生物还原。积极增殖的细胞会提高其代谢活性，而暴露于毒素的细胞则会降低代谢活性。

MTT细胞增殖测定

MTT （3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑；噻唑蓝）是一种水溶性四唑盐，在缺乏酚红的培养基或盐溶液中制备时会产生淡黄色溶液。溶解的 MTT 在脱氢酶的作用下裂解四唑环，转化成不溶于水的紫色石榴石。这种不溶于水的甲臢可以用异丙醇或其他溶剂溶解，溶解的物质用分光光度法测量，吸光度是转化染料浓度的函数。

XTT细胞增殖测定

与MTT不同， XTT 的裂解产物可溶于水，因此不需要增溶步骤。四氮唑盐 XTT 通过复杂的细胞机制裂解成甲状腺素。这种生物还原只发生在有活力的细胞中，与通过糖酵解产生的 NAD(P)H 有关。形成的福尔马林染料量与培养物中代谢活跃细胞的数量直接相关。

WST-1细胞增殖检测

稳定的四唑盐 WST-1 通过主要发生在细胞表面的复杂细胞机制裂解为可溶性的甲臢。这种生物还原在很大程度上依赖于有活力细胞中 NAD(P)H 的糖酵解生成。形成的福尔马林染料量与培养物中代谢活跃细胞的数量直接相关。

方案指南：细胞活力和增殖的 WST-1 检测。操作规程、常见问题和故障排除

 发光细胞存活率测定

由于 ATP 是细胞代谢活跃的指标，因此可根据可用的 ATP 量评估存活细胞的数量。ATP 细胞活力荧光素酶检测试剂盒 为量化细胞培养物中的 ATP 提供了一种高灵敏度的均质检测方法。该试剂盒利用萤火虫荧光素酶氧化 D-荧光素并产生光来评估细胞培养物中可用的 ATP 量。灵敏的检测程序是将 ATP 检测鸡尾酒直接添加到在血清补充培养基中培养的细胞中。无需清洗细胞、移除培养基或多次移液。该试剂盒的灵敏度足以检测一个细胞或 0.01 皮摩尔的 ATP。产生的信号在六个数量级内呈线性。通过将 ATP 的数量与存活细胞的数量联系起来，该检测方法应用广泛，从测定存活细胞数量到细胞增殖再到细胞毒性，不一而足。

三维细胞培养--活细胞/死细胞/总细胞三重染色

细胞活力成像试剂盒 是一种三色检测方法，可用于二维和三维细胞培养，同时对存活细胞（钙黄绿素-AM）、死亡细胞（碘化丙啶/PI）和总细胞（Hoechst 33342）进行荧光染色。

• 钙黄绿素-AM 在与钙结合时发出绿色荧光，这依赖于只存在于代谢活跃的存活细胞中的酯酶活性。
• 碘化丙啶 （PI）是一种核染料，能被活细胞膜排斥，但能穿过死细胞受损的膜，与 DNA 相互结合，发出强烈的红色荧光。
• Hoechst 33342 是一种细胞毒性低的 DNA 染色染料。它发出蓝色荧光，可作为细胞总数的指标。