细胞生长和维持

细胞生长阶段

确保细胞充分生长对于从细胞培养研究中获取准确数据至关重要。细胞计数可通过血细胞计数板或自动细胞计数仪进行，后者能提供更精确的计数结果。

细胞在培养中的生长通常经历四个阶段：

1. 滞后期——细胞正在适应培养条件，此时不进行分裂。
2. 对数生长期——细胞处于活跃分裂状态，因此这是评估细胞群生长或收集数据的最佳阶段。对数生长期的后期是传代（亚培养）细胞的最佳时机。
3. 平台期（静止期）——随着细胞汇合度接近100%，生长速度减缓；此时细胞废物积累、资源耗尽，细胞最易受到应激或损伤。
4. 衰退期——随着细胞死亡占主导地位，活细胞数量逐渐减少。

细胞培养基、补充剂和试剂

培养细胞需要营养物质来维持生长。哺乳动物细胞培养基除了必须提供均衡的盐类、碳水化合物、氨基酸、维生素、脂肪酸和脂质、蛋白质和肽、微量元素以及生长因子外，还必须维持生理pH值。 胎牛血清（FBS）是哺乳动物细胞培养中最广泛使用的生长补充剂，因为它含有上述许多必需的细胞营养物质，且已被证实能支持培养中细胞和组织的生长。对于需要定义培养基或减少动物成分的应用，无异种成分培养基配方提供了成分明确的无动物来源配方。

由于培养基和补充剂通常为条件致病微生物的生长提供了丰富的营养，因此成功的细胞培养需要采用无菌操作技术并进行定期观察，以确保不存在可能导致细胞死亡或干扰类体内生长情况的污染物。对于无法通过显微镜观察到的常见微生物污染物，使用支原体检测试剂进行常规筛查可保护细胞培养和组织扩增环境。  

酵母培养物，如酿酒酵母（S. cerevisiae）和帕斯托氏酵母（P. pastoris，Pichia），常用于重组蛋白表达和基因功能研究。酵母培养基配方中通常包含的关键营养成分包括蛋白胨、酵母提取物以及麦芽糖或葡萄糖。

细胞传代技巧与诀窍

细胞培养环境和培养器皿

培养细胞的生长和操作使用一次性无菌塑料器皿，包括组织培养瓶和多孔板、血清移液管、无菌瓶顶滤器以及无菌注射器滤器。塑料组织培养瓶和培养板通常经过处理，以形成亲水表面，从而促进贴壁细胞的附着。 作为二维表面的替代方案，基于微孔膜的培养板为复杂的细胞实验（如细胞迁移、细胞间通讯和细胞极化）提供了更接近生理条件的生长环境。

培养细胞必须在能够再现其来源生物体内相应参数的温度和气体环境中维持。含有细胞和培养基的培养器通常放置在能够精确控制温度和气体混合物的培养设备中。然而，采用微流控技术并能实现对持续培养中细胞成像的小型台式培养系统，能够为预测性体外模型提供最真实的环境。