细胞培养故障排除

细胞系鉴定错误

近期研究估计，误识别现象可能影响多达三分之一正在使用的细胞系。这些发现可能会使基于细胞系模型结果发表的关于生物系统的研究成果受到质疑。导致细胞系误识别/交叉污染的因素包括：

• 被侵袭性细胞系污染：同工酶分析表明，许多细胞系与HeLa细胞共享一种罕见的酶同工型。此后研究证实，HeLa是细胞库中最为常见的侵袭性细胞系。
• 记录与标记规范：细胞培养瓶、培养板、冷冻管及冷冻柜必须清晰标记，并严格维护液氮储存记录，以反映细胞库的添加、提取和转移情况。
• 细胞系借用：邻近实验室之间共享细胞是一种常见做法，但会导致细胞系鉴定错误。细胞系应仅从信誉良好的细胞库获取，例如ECACC（欧洲认证细胞系库）以及英国公共卫生署（PHE）的欧洲认证细胞系库。

请了解细胞系交叉污染的常见原因，以及如何保护您的研究免受其影响。

细胞培养中的微生物污染

细胞培养基和培养条件不仅为细胞提供了理想的生长环境，同时也为细菌、真菌和病毒等污染物提供了滋生的温床。为了确保严格遵守无菌培养技术，必须定期通过显微镜检查培养物，以排查细菌和真菌入侵的迹象。某些普遍存在的微生物污染物难以通过肉眼检测，据估计，多达30%的培养物都受到支原体的污染。 用于检测肉眼不可见的支原体的试剂和检测试剂盒通常基于PCR扩增技术，该技术也可用于检测病毒污染物。

了解如何确保您的培养物免受生物和化学污染。

细胞生长不良

当培养中的细胞看似健康却无法达到汇合状态时，这确实令人沮丧。在排除污染物因素后，可能阻碍细胞正常增殖的因素包括：

• 培养基/冷冻培养基的条件与质量
• 补充剂的质量及其与应用的适配性
• 冷冻或传代过程中细胞计数不准确

当细胞看似存活但无法增殖时，在将其送回液氮冷冻之前，请了解如何优化培养条件以促进最佳生长。

贴壁细胞表型的脱落

贴壁细胞在培养过程中可能会自发脱落，既可能单个脱落，也可能成片脱落。当贴壁细胞培养失去贴壁状态时，应明确需要检查哪些方面，以及如何恢复培养体系中的细胞粘附性。

细胞结块

悬浮培养中的细胞以单个细胞的形式存在，这模拟了体内环境。当细胞开始聚集成团时，这可能是由于培养基中存在粘性核酸所致——当细胞受到应激时，培养基中会产生此类物质。培养基中究竟隐藏着什么会导致细胞聚集成团？点击此处了解更多关于如何消除培养物中细胞聚集成团现象的方法。

培养中的细胞死亡

当细胞在培养过程中死亡时，首先必须排除微生物污染的可能性。其他可能导致细胞健康状况不佳或表现与表型不符的因素包括：

• 冷冻库存条件
• 细胞传代次数/过度汇合
• 环境应激
• 分离酶消化过度

使用合适的设备、合格的试剂以及专业的操作规程，是解决细胞培养中意外结果的关键。

培养基中的沉淀物

如果不是污染所致，培养基中的颗粒物通常有无机原因。了解平衡缓冲液和培养基成分，并进一步了解如何使培养基成分保持悬浮状态。