抗体标准验证

任一免疫检测实验的成功都离不开所用抗体的质量。遗憾的是，抗体试剂彼此间可能存在巨大差异，因此在为下游应用选择抗体时，最好花时间确认该抗体已针对特定实验环境进行测试，同时经证具有所需的特异性、灵敏度和可重现性。这一重要的数据在抗体生产和验证过程中生成，记载在抗体随附的产品数据说明书中。

抗体信息

生成抗体所用的免疫原性质相关的详细信息，可作为指示抗体是否充分适合特定应用的良好指标。免疫原通常是全长蛋白质、蛋白质片段或多肽，有时也可能使用细胞或完整的生物体。例如，如果研究人员希望通过免疫检测确认C末端重组蛋白片段在转染细胞系中的表达情况，则选择靶向目标蛋白N末端的抗体基本无任何效果。又或者您希望通过避免裂解或细胞渗透的操作方案免疫检测细胞表面蛋白质，则最好选择靶向细胞外蛋白区域——而非胞内蛋白区域的抗体。

此外，还应考虑到抗体的克隆能力。通过动物免疫接种生成的多克隆抗体制剂由一组仅识别一部分靶标的抗体组成。这种试剂的性能因免疫接种动物而存在很大差异，即无法保证持续提供结合能力一致且可重现的抗体。而单克隆抗体则通过杂交瘤技术产生，仅识别单一抗原表位，可轻松大规模生产。由于具有一致的性能，单克隆抗体通常被用作首选抗体——尤其是筛选计划等长期项目。

通过免疫亲和纯化，可从多克隆抗体制剂中富集靶标特异性抗体，但并非所有多克隆抗体均可通过这种方式纯化。许多多克隆抗体采用类别特异性亲和纯化方法，这类方法依赖抗体Fc区域的结合能力差异免疫捕获各类蛋白质（例如蛋白A或蛋白G）。尽管这种方法可以富集特定种类的抗体并可去除大多数血清蛋白，却无法去除非特异性抗体，即仍难免存在部分交叉反应活性。单克隆抗体制剂之中仅含有目标抗体，故无需进行亲和纯化。

由于不同同种型的抗体存在生物性质和功能差异，进而影响背景染色水平，因而知晓免疫检测所用的抗体同种型会很有帮助。同种型对照与下游应用所用的抗体为同一同种型，但对靶标抗原无任何特异性。它们常用于区分背景染色和特异性抗体读取结果。

表位图谱可提供更多抗体结合特性相关的信息——尽管抗体制造商通常不会定期进行此类处理。靶向天然构象蛋白的抗体通常与结合构象或不连续表位，如果用这类抗体免疫检测还原和变性形式的蛋白质，成功结合的概率很低。同样，靶向多肽免疫原的抗体可能也无法识别并结合蛋白质处于完全折叠状态的表位。

靶标信息

研究人员通过钻研靶标蛋白相关的背景信息，可清晰掌握从所选样品材料检测到这种蛋白的概率。我们的Prestige Antibodies^®享有人类蛋白质图谱数据库提供的数据支持，其中包含大量有关组织水平和细胞内蛋白表达情况的信息，以及正常和癌变组织表达差异相关的详情。通过这一强大的资源可自由探索组织或细胞定位模式并选择抗体试剂，同时还可针对某一研究选择适当的阳性和阴性对照材料。

UniProt是另一重要的分子靶标相关信息来源，例如，可将其用作蛋白质理论分子量的参考点。其中还包括已知存在的同种型数量、某一同种型在特定条件下或特定类型细胞或组织中含量是否过高，以及蛋白翻译后修饰方法等详细信息。另请注意，翻译后修饰可能大幅影响蛋白质的理论分子量，导致蛋白质免疫印迹检测条带宽度远超最初预期。

部分情况下，我们可能还需要利用指定实验条件增强靶标蛋白表达水平，使其达到免疫检出水平。例如，可利用缺氧条件促进HIF蛋白表达，通常可利用自噬诱导产生可度量水平的蛋白质（例如LC3），可利用细胞核或线粒体组分促进检测特异性靶向这些细胞亚区室的蛋白。通常需要查阅相关文献了解其他研究团队识别特定蛋白靶标所用的技术——尤其是那些难检测靶标。

物种验证

在很多情况下，由于序列具有高度跨物种同源性，靶向人类抗原产生的抗体也可能识别其​​他物种（例如小鼠、大鼠或兔）样品中的同一抗原。但我们无法通过推断简单判断这一情况，有关已进行此类测试的抗体并适用物种的详细信息还需参阅产品数据说明书。通常，其中还会详细列出已经测试且经证无效的物种，以及预期对未测试物种的反应性。

在预估预期反应性时，MultAlin和ClustalW2等免费在线资源可用作执行序列比对的利器。这类资源可提供不同物种同一蛋白形式的同源性百分比，还可用于辅助快速目视判断最大相似或相异点。

应用验证

产品数据说明书通常会列出已进行抗体测试的所有应用，其中最常见的应用实例包括蛋白质免疫印迹（WB）、免疫细胞化学、免疫组化(IHC)、ELISA和流式细胞分析。关于IHC需要特别注意的一点是，利用抗体用于检测冷冻组织时的表现，可能与检测福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样品时有所不同。不能因为抗体与冷冻组织内的抗原成功结果，就推断用于FFPE样品会得到相似结果——反之亦然；数据说明书中应详细说明利用抗体进行过IHC验证的样品类型。

对于列明抗体适用的应用，通常会提供指导性的建议操作方案。这类操作方案通常包括建议的抗体起始稀释度和孵育时间，但终端用户仍需针对每一实验条件进行优化。

在蛋白质免疫印迹（WB）中展现出良好性能的抗体，应检测到清晰的预期分子量条带，最大限度避免背景染色；而在免疫细胞化学或IHC应用中展现良好性能的抗体，应具有与文献记载一致的预期染色模式。如果资料说明抗体适用于ELISA，最好查阅一下利用其进行测试的其他ELISA相关详情；如果进行了夹心式ELISA，则留意是否就此推荐了特定的配对抗体。流式细胞分析所用的抗体通常直接与荧光染料结合，从而帮助检测。这种特性的优势在于可以观察到结合染料的激发和发射波长，因此可避免在构建多色流式细胞实验时形成串扰。

储存和处理信息

部分抗体以溶液形式提供（其中可以含有腹水、组织培养上清液或溶于特定缓冲液的纯化抗体产物），其他抗体以需要重悬的冻干粉形式提供。液态抗体开封前务必短暂离心，以防产品损失或受污染。应根据制造商的说明小心重悬冻干粉抗体。由于抗体冻干通常在存在各种缓冲液成分的情况下进行，因此必须严格遵守重悬说明，避免不慎改变最终缓冲液成分、影响抗体性能。

许多抗体在冷冻或反复冻融循环后性能会出现损失。抗体数据说明书会根据特定产品详细说明适当的储存条件。已经偶联荧光染料或荧光蛋白的抗体通常无法耐受冷冻，且保质期短于未偶联的抗体产品。为避免接触光线，这类产品通常装在不透明的管中提供；使用荧光偶联抗体时，为避免荧光信号损失，在遮光条件下进行储存及所有下游孵育步骤至关重要。

批次验证

每个单独批次的抗体都应提供批次专有的数据，包括该批次浓度及已经过测试的各项应用等验证数据。切勿武断地推断——尤其是多克隆抗体——所有批次抗体均呈现相同的行为模式；在将每一新批次抗体用于稀缺的样品材料前，最好基于适当的对照和之前批次的抗体，针对预期应用进行内部测试。

引用

抗体产品页面包含引用该抗体的文献列表。PubMed和CiteAb是优异的建议免疫染色方案相关信息来源，通常包含抗体成功应用的样品类型等详细信息。如果为单克隆抗体，通常可通过快速在线搜索克隆名称获取各种额外信息，如来源及更深入的生产方法描述。

质量控制

我们是一家生产设施遍布全球的国际化企业。我们的开发和制造工艺受到严苛的质控和质量保证措施约束，可针对每个抗体产品提供全面的分析证书和产品信息说明书。

仅供研究使用。不可用于诊断流程。

除非产品规格中另有说明，否则任何抗体产品均仅供内部研究使用，不得用于任何其他目的——包括但不限于任何商业、诊断或治疗用途。我们的验证过程仅基于研究用途，并未确认或担保我们的抗体适用于本文未授权的任何用途。