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X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂实验方案

转染细胞准备

约转染前24小时接种细胞,确保细胞处于最佳密度(70–90%融合度)。

转染前步骤

  1. 待X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂、DNA和稀释液(Opti:MEM®I减血清培养基或无血清培养基)回温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。
  2. 稀释液加入无菌试管中。
  3. 加入质粒DNA。轻轻地上下吹打混匀。
  4. 向稀释的DNA中加入X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂。
  5. +15°C 至 +25°C 孵育 15 min。
  6. 逐滴向细胞中加入转染复合物。
  7. 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  8. 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 18-72 小时。
不同比例下的X-tremeGENE™ HP DNA转染试剂体积和DNA含量

X-tremeGENE™ DNA转染试剂成功转染技巧 

  1. X-tremeGENE 9DNA 转染试剂保存在 +2~+8℃温度下,X-tremeGENE HP DNA 转染试剂保存于-15~-25℃温度下。
  2. 将盛有 X-tremeGENE DNA 转染试剂的小瓶置于 +15~+25°C温度下,涡旋 1 秒钟,然后取出所需量。
  3. 请勿将 X-tremeGENE DNA 转染试剂分装;将剩余的转染试剂储存在原始玻璃瓶中。
  4. 尽量减少未稀释的转染试剂与塑料表面的接触。
  5. 取出所需量后,使用后立即紧扣小瓶盖。
  6. X-tremeGENE DNA 转染试剂的最小用量:用于转染的 DNA 复合物是 100μl。较低体积的复合物形成过程显著降低转染效率。
  7. 请勿将聚苯乙烯制成的试管或微孔板用于 X-tremeGENE DNA 转染试剂:DNA 复合物制备。当不能避免使用聚苯乙烯材料时,一定要将转染试剂直接移液到无血清培养基中,或加入低血清培养基(不含任何血清)。
  8. 请勿使用含硅吸头或吸管。
  9. 确定转染时细胞仍在活跃生长。
  10. 通过加入含下列内容的微孔,在进行转染时加入适当的对照品:
    (1) 未转染细胞
    (2) 只带转染试剂的细胞
    (3) 仅带 DNA 的细胞
  11. 转染试剂的最佳配比:DNA 和复合物的最佳总量可能随着细胞系、细胞密度、用于测定的细胞生长状态和基因表达的不同而变化。
材料
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