脂肪酶活性测定实验方案

原理

用分光光度法在545 nm处测量醌亚胺染料的外观。

单位定义

一个单位指在下述条件下每分钟导致形成一微摩尔甘油（半微摩尔醌亚胺染料）所需要的酶量。

方法

试剂

操作流程

（第1步）

1. 将2.0 mL橄榄油乳剂（A）吸移到试管中，在37 ℃下平衡约5分钟。

2. 加入0.2 mL酶溶液*并混合。
3. 在37 ℃下反应15分钟后，加入2.0 mL TCA溶液（E）以终止反应，并用滤纸（Toyo-Roshi No.131或Whatman No.42）过滤除去沉淀物。
   

（第2步）

4. 将所获得的0.05 mL滤液转移到试管中。
5. 加入3.0 mL显色试剂（G），37 ℃下孵育15分钟。
   
6. 对照水，测量545nm处的光密度（OD测试）。
   

与此同时，制备空白试剂：在37 ℃下用2.0 mL TCA溶液孵育15分钟后，首先混合2.0 mL橄榄油乳剂（A），然后加入酶溶液（第1步）。使用从混合物获得的滤液，按照与测试相同的程序步骤进行第2步，并测量545nm处的光密度（OD空白）。

* 将酶制剂溶解于冰冷的酶稀释剂（H）中，并在测定前立即用相同的缓冲液稀释至0.4 - 1.2 U/mL。

计算

可以使用以下公式计算活性：

重量活性（U/mg）=（U/mL）×1/C

此操作方案仅供参考。