聚丙烯酰胺凝胶通过丙烯酰胺与双丙烯酰胺(N,N’-亚甲基双丙烯酰胺)的反应形成,产生高度交联的凝胶基质。凝胶充当筛子,蛋白质在电场作用下通过这个筛子。蛋白质总体带正电或负电,这使得蛋白质分子能够朝向等电点移动,在等电点分子没有净电荷。通过使蛋白质变性并赋予它们均匀的负电荷,可以在它们向正电极迁移时基于它们的大小分离它们。
图 1.蛋白质样品和色同步蛋白标记物的SDS-PAGE(C1992)
注意:丙烯酰胺和双丙烯酰胺在性质上具有神经毒性。所有步骤均应佩戴无粉手套进行。
* TEMED必须最后添加。
考马斯蓝染色:用考马斯亮蓝R-250染色蛋白质凝胶是显示通过SDS-PAGE分离的蛋白质的常用方法。它非常灵敏,适合长期储存凝胶。
我们提供适用于SDS-PAGE凝胶的高灵敏度蛋白质检测银染试剂盒。还需要以下试剂:
双重染色:使用CBB R-250对凝胶进行染色,然后使用上述步骤进行银染色。
荧光染色:我们为蛋白质电泳提供荧光SYPRO和Lucy染色剂。可以在黑暗中将凝胶浸入荧光染色剂中,或者在电泳过程中将凝胶与阴极缓冲液混合。
染色实验方案取决于所使用的染色剂,可以在此处找到:
可逆凝胶染色使用户能够在SDS-PAGE后进行蛋白质的蛋白质免疫印迹。
R-PROB染色:R-PROB是一种独特的染色剂,可用来检测PAGE凝胶和蛋白质免疫印迹上的蛋白质。
铜染色:为了确认蛋白质的迁移和分离,凝胶可以用可逆染色剂(如CuCl2)染色。
图 2.印迹和垂直电泳系统
如果需要在电泳后将蛋白质转印到膜上,在此处可以找到实验方案。
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