详解高效蛋白研究的
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首先，让我们来了解高效蛋白研究的原理
通过基因克隆使目的蛋白带上一段合适的序列，形成标签-目标蛋白的融合蛋白，并采用主要基于标签抗体特异性亲和结合，对带标签的目的蛋白进行纯化、鉴定和功能研究，这种策略极大地简化了对目标蛋白的制备和分析，多方面提高了蛋白研究效率。
根据研究要求，融合标签需要具备相应的特点，目前有近20种常用标签，主要在三方面得到广泛应用：
1.重组表达生产
将标签基因序列克隆在目的蛋白的N或C端，经宿主细胞表达获得融合蛋白，并根据标签建立纯化方法。纯化方法要求特异性好，保持蛋白活性。小标签对蛋白本身影响小，相对更受欢迎。一些大标签可提高目的蛋白活性表达水平，可在纯化后酶切去除。
2.天然蛋白制备和互作研究
低丰度蛋白在宿主细胞中重组适当过表达后，在细胞环境中与其它蛋白相互作用，用coIP方式获得互作复合物，从而探查到与目的蛋白有相互作用的蛋白或蛋白复合物，是信号通路传导研究的经典、常规方法。要求标签不干扰目的蛋白功能，通常采用小标签。Pulldown是一种体外蛋白互作研究方法，常用GST标签温和纯化体系，而TAP则是更精细的体内互作研究方法。
3.功能定位与分析
细胞内定位、定性/定量检测带标签的目的蛋白，系列荧光蛋白是最常用的便于直观检测的标签。FLAG和cMyc等小标签也常用于流式细胞检测。
问题来了，应该怎样选对标签，才能获得更好的纯化和功能研究结果？
理想的标签应该具有以下特征：
• 结合基质对低浓度目的蛋白的有高亲和力
• 结合基质对目的蛋白的特异性结合远高于杂蛋白
• 具备使目的蛋白能高效而特异性洗脱的条件/试剂
• 洗脱条件能保持蛋白相互作用和蛋白复合体结构
FLAG、Strep、HA、cMyc等分子量小不干扰互作，同时特异性极佳，是从众多序列中优选出来的融合标签，其中尤以FLAG在各种细胞系统中最为通用。
FLAG标签是一种经精心设计的短链亲水8-氨基酸肽(DYKDDDD)，用于蛋白纯化和检测的研究工具，已广泛应用于各种细胞类型。这个小肽分子量仅为1.01kDa，却有着别的标签不具备的显著优势：
• 对目的蛋白没有干扰-不会占据表位与结合域，对融合蛋白的功能、分泌性以及转运影响极小
• 纯度高-M2抗体特异性极佳，通常FLAG纯化得到的蛋白纯度足够高而不需要进一步纯化
• 亲水性好-定位在融合蛋白表面，非变性亲和层析获得有活性的高纯度蛋白
• 灵敏度高-不论标签N-/C-端或内部，均可被抗FLAG的抗体识别，灵敏度是其它标签的20–200倍，达到<10fmol
• 去除方便-融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK）而得到天然目的蛋白
• 应用广泛-用于细菌、酵母和哺乳细胞系统，可以用IP-coIP /IHC/ICC/IF/WB/ELISA/流式细胞等检测、鉴定
默克生命科学提供完备的FLAG系列产品
拥有FLAG®和ANTI-FLAG®注册商标，纯化树脂/磁珠/抗体的质量被业界高度推崇
产品线配套齐全，全方位满足FLAG相关表达、纯化、检测等需求
FLAG® 标签蛋白表达
FLAG® 标签蛋白表达组合包括用于重组融合蛋白在细菌和哺乳动物系统中高效表达的载体。
3xFLAG® 标签序列融合三个串联FLAG® 标签，其对融合蛋白的检测能力大为增强（高达200X）。
我们提供各种琼脂糖亲和纯化凝胶、磁珠、纯化试剂盒和涂层板，用于分离和提纯FLAG® 标签蛋白。
琼脂糖亲和凝胶使用与珠状琼脂糖交联的anti-FLAG®抗体进行融合标签蛋白的纯化。其适用于小规模到大规模的纯化，且这些树脂适合重力流柱纯化。
ANti-FLAG®M2磁珠于提纯重组融合标签蛋白，其使用磁性支架或平台来分离磁珠和蛋白质，以便进行快速加工。
- 高灵敏度Anti-FLAG® M2包被的96孔板适于表达筛选、蛋白质互作研究以及ELISA分析
FLAG® 标签蛋白检测
FLAG®和3xFLAG™标签包括高度特异性的anti-FLAG®单克隆抗体以及多克隆抗体和，用于ELISA、印迹应用、免疫荧光、免疫细胞化学、免疫组织化学（IHC）、印迹和流式细胞术等应用。
M2 anti-FLAG®抗体可结合N-端FLAG®、C-端FLAG®和Met-FLAG®融合蛋白, 形成的纯化琼脂糖/磁珠和检测抗体成为行业标杆产品。
M1 anti-FLAG®抗体结合具有钙离子依赖性，且对FLAG®标签的N-端具有特异性。
M5 anti-FLAG®抗体可结合N-端FLAG®、C-端FLAG®和Met-FLAG®融合蛋白。
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