β-半乳糖苷酶染色剂

来自大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因被广泛用作报告基因测定标记。尽管 X-gal 是检测细胞或组织样品中β-半乳糖苷酶的经典试剂，但由于其细胞渗透性差，使用这些试剂进行的分析需要固定细胞或组织。另外，迄今为止开发的使用荧光试剂的测定不能清楚地区分表达β-半乳糖苷酶的细胞或区域。

为了克服这些问题，Urano、Kamiya 和他的同事们已经成功开发出一种理想的染色剂，该染色剂具有细胞渗透性并能保留在细胞内区域。^1）

通过酶促反应，β-半乳糖苷酶染色剂快速形成醌甲基化物，在含亲核官能团的蛋白附近可发挥亲电作用。探针与蛋白反应形成的结合物成为了荧光化合物。因此，它可以进行单细胞分析，因为它可以自固定到胞内蛋白上。
最大激发波长： 530 nm (± 10 nm)
最大发射波长：550 nm (± 10 nm)

参考文献:
¹⁾ Y. Urano, M. Kamiya, T. Doura, WO 2015174460, A1, (19, November, 2015).

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1 mmol染色剂（DMSO溶液）储备液的制备
将 35 μl DMSO 加入一管染色液(20 μg)中，通过移液吹吸将其溶解。
*将原液保存在 -20°C 下。

1 μmol/l染色剂工作液的制备
使用 Hanks′ HEPES 缓冲液稀释染色剂（DMSO溶液）储备液来制备 1 μmol/l 的染色剂工作液。
*建议使用Hanks′ HEPES缓冲液维持细胞状态。

通用实验方案：

染色
1.制备检测用细胞。
2.弃去培养基，并用Hanks′ HEPES缓冲液洗涤细胞2次。
3.添加适量的染色剂工作液。
4.37℃孵育15分钟。
5.在荧光显微镜下或通过流式细胞仪观察细胞。
*染色后，即使不洗涤也可以观察到细胞。但是，您可以根据需要洗涤细胞。