CN

小分子HPLC

科学家正在查看HPLC色谱图

小分子分析

小分子特指低分子量化合物(通常小于900道尔顿)。常见小分子包括氨基酸、脂质、糖类、脂肪酸、生物碱等。

现有多种方法可供分离小分子,包括 高效液相色谱(HPLC)液相(LC)气相(GC)、薄层色谱(TLC) 和毛细管电泳(CE)。此外,还可通过磁共振波谱法(NMR)或 质谱法(MS)等方法鉴定小分子。最近几年液相色谱-质谱联用分析(LC-MS)成为重要的小分子鉴定技术。

能否确保高效液相色谱HPLC、UHPLC或LC-MS获得理想的小分子分析结果,取决于是否选择了最适宜的固定相和流动相条件。分析物化学特性是决定最适宜的柱化学试剂选择的关键。而速度、样品基质和化合物含量等其他因素决定了最适宜的固定相基质材料。

小分子HPLC分析

小分子HPLC分析通常采用反相分离方式。极性化合物分离可选用亲水作用色谱(HILIC)和正相色谱,前者效果更佳。离子化合物分离可选用离子交换分离方式,有机阴离子或阳离子还可选用离子色谱法。

HPLC色谱柱可填充全孔二氧化硅颗粒、表面多孔颗粒、聚合物颗粒或以整体型硅棒作为固定相,也可使用氧化铝、氧化锆颗粒和碳颗粒。分离小分子时,固定相材料的典型孔径范围为60Å-160Å。HPLC固定相粒径通常为3µm至5µm范围,UHPLC粒径通常为2µm或更小。固定相可连接不同的柱选择性修饰。C18烷基链是反相(RP)色谱法中最常用的柱化学修饰。但其他修饰——如C30、C8、苯基、五氟苯基和广泛的极性更强的修饰以及具有离子交换或手性的修饰——几乎可以分离所有溶于液体的化合物。RP-HPLC的流动相通常含有水相缓冲液或水和水溶性有机溶剂,如乙腈或甲醇。


相关技术文章

  • 识别、纠正常见HPLC问题,恢复色谱柱性能。通过色谱图示例,获取解决峰相关问题(峰分裂、峰拖尾、峰前延等)、保留时间、吹扫噪声及分离度下降问题排查帮助。
  • 智能。直观。让您无忧无虑地工作,最大程度提升实验室工作效率。创新的人体工程学设计以及强大的纯化树脂,确保优质超纯水源源不断。不妨了解一下Milli-Q® IQ 7000是如何改变您在实验室中的工作方式的。
  • 智能。直观。让您无忧无虑地工作,提升实验室工作效率。创新的人体工程学设计以及强大的纯化树脂,确保优质超纯水源源不断。不妨了解一下Milli-Q® IQ 7000是如何改变您在实验室中的工作方式的。
  • 使用 HPLC 和 SPE 的离子交换聚合物基颗粒测定燕麦片和婴儿谷物中的草甘膦及相关化合物。获得低水平的检测结果。
  • Select HLB SPE是一种亲水性聚合物相,用于从水性基质中提取分析物。在本文中,它将用于从血浆中提取他汀类药物,以及从饮用水中提取48种药物分析物。
  • 使用分子印迹聚合物SPE提取安非他明及相关药物
  • 查看完整内容

相关实验方案


HPLC样品制备

复杂及基质丰富的样品,如食品、饮料、化妆品、生物样品和基质丰富型药物制剂(如乳膏剂、糖浆剂)需要有效的样品制备方法来除去无关组分并选择性提取目标分析物。这一点对于粒径极小的固定相尤其重要,如粒径为2µm或以下的UHPLC。常用的样品制备方法有液-液提取、固相提取(SPE);对于生物样品,除过滤处理外,还需进行蛋白沉淀。除选择性洗脱目标化合物和预浓缩外,样品制备的主要目标是保护HPLC固定相不会因样品基质造成堵塞。硅胶整体化HPLC色谱柱可容纳大量基质,样品制备工作远少于颗粒型色谱柱。

衍生化

某些小分子需要在HPLC分离前(柱前)后(柱后)进行衍生化。衍生化步骤可将分子转化为其衍生物,从而提高HPLC灵敏度或色谱保留性。须根据所需的衍生化反应选用具有所需物理和化学性质的化学试剂。






产品亮点