通过过滤进行样品制备

过滤是一种分离技术,用于根据物质的物理或化学性质对其进行浓缩或纯化。这是一种简单且常规的方法,广泛应用于许多实验室中,用于从溶液中去除不溶性颗粒,并制备待分析样品。过滤可用于降低样品的复杂性、提高粘稠样品的澄清度,并减少背景信号,从而在分析测试中提高信噪比。
精选分类
根据所采用的过滤方法,颗粒或分子会根据其大小、形状或电荷等特性被分离。通过滤膜的液体称为“滤液”,而被收集或截留的物质则称为“截留液”或“残留物”。
- 反渗透(离子分离)利用半透膜或屏障来分离离子或分子。 施加的压力克服渗透压,迫使溶剂从高溶质浓度区域向低溶质浓度区域移动。反渗透可截留除颗粒物以外的大部分有机物,以及超过99%的盐类。典型的膜规格基于氯化钠截留率(<0.001 µm,<100 道尔顿)
- 超滤(大分子分离)是根据颗粒大小将颗粒和溶解分子从流体中分离出来。超滤用于浓缩、分馏、脱盐和缓冲液置换。典型的规格是名义分子量限(NMWL)在1-1000 kDa之间。
- 微孔过滤(微滤)用于颗粒截留/排除及灭菌,因其能根据颗粒大小分离/去除颗粒及生物实体(如细菌和细胞)。孔径通常在0.025-10 µm之间,其规格分为名义孔径(~98%截留率)或绝对孔径(对等同于孔径规格的颗粒实现100%截留)。
- 澄清滤器用于预过滤和颗粒分析,因其能根据尺寸截留/去除大颗粒、聚集体和碎屑。它们可作为微滤前的初级过滤步骤。澄清滤器的孔径通常大于5 µm。
常见的过滤应用
- 一般颗粒去除
- 为高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱(UHPLC)、离子色谱、气相色谱及溶出度试验等分析技术进行样品制备
- 细胞培养添加剂的灭菌
- 蛋白质、核酸和聚合物的浓缩
- 样品中生物分子的分离
- 缓冲液制备
- 水净化
过滤是进行高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱(LC-MS)等高灵敏度色谱分析前必不可少的样品制备步骤。样品中的颗粒物会通过堵塞色谱柱或柱头,或在色谱图上产生污染物峰(“鬼峰”),从而干扰液相、气相和离子色谱分析。 对样品、溶剂和缓冲液进行适当的过滤,可获得更高质量、更一致的分析结果。它还能提高仪器运行时间并延长色谱柱的使用寿命。
过滤工艺与流程的类型
市面上有多种滤膜,其过滤介质成分各异,每种均针对特定应用而设计。滤膜的选择取决于多个因素,包括:
- 需截留或允许通过的颗粒或分子大小
- 样品的化学组成
- 过滤介质与样品或溶液的相容性
- 样品粘度
滤器可由不同类型的材料制成,例如滤纸、滤布、棉絮、石棉、矿渣棉或玻璃棉、未上釉陶器、砂子或其他多孔材料。膜滤器通常由合成聚合物制成(例如亲水化聚四氟乙烯、聚偏二氟乙烯、尼龙、聚醚砜)。
可施加不同的驱动力来驱动过滤过程。过滤可通过简单的重力(使用滤纸和漏斗)、手动(如注射器过滤)或离心力来驱动。在真空驱动过滤中,使用真空泵将流体快速抽过滤纸。
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