二级抗体

蛋白质 A、G 和 L

蛋白质 A 来自金黄色葡萄球菌。蛋白 G 来自链球菌。两者都有与哺乳动物 IgG 的 Fc 部分结合的位点。这些蛋白质对 IgG 的亲和力因动物种类而异。蛋白 G 对大鼠、山羊、绵羊和牛的 IgG 以及小鼠 IgG1 和人类 IgG3 的亲和力较高。蛋白 A 与猫和豚鼠 IgG 的亲和力较高（表 1）。除了 IgG 的 Fc 结合位点外，原生蛋白 G 还含有白蛋白、Igs 的 Fab 区和膜结合区的结合位点，这可能导致非特异性染色。为解决这些问题，人们创造了重组形式的蛋白质。重组蛋白 G 经过工程改造，去除了白蛋白结合区，重组蛋白 G′是一种截短蛋白，缺少白蛋白、Fab 和膜结合位点，但保留了 Fc 结合位点，使其对 IgG 的特异性高于原生形式。

蛋白 L 来自于 Peptostreptococcus magnus，对不同物种的 kappa 轻链（表 2）具有亲和力。它能检测单克隆或多克隆 IgG、IgA 和 IgM，以及含有 kappa 轻链的 Fab、F(ab′)2 和重组单链 Fv (scFv) 片段。注意：牛、山羊、绵羊和马等物种的 Igs 几乎只含有λ链，因此它们与蛋白 L 的结合效果不佳。

检测试剂

蛋白 A 和蛋白 G 是用于结合哺乳动物组织中一抗或表面 IgG 的通用、非物种特异性试剂。蛋白 G 推荐用于大多数物种，包括小鼠和大鼠。蛋白 A 推荐用于猫和豚鼠。两者都不推荐用于检测 IgA 或 IgM、检测 Fab 片段或检测禽类 IgG。当与琼脂糖等树脂结合时，蛋白 A 和蛋白 G 可用于从血清或腹水中亲和性纯化免疫球蛋白。

蛋白 L 是一种通用试剂，用于结合哺乳动物或禽类的一抗或各类表面 Ig。特别适用于检测 Fab、F(ab′)₂ 片段和重组 scFv 片段，检测与 Fc 受体结合的 Igs，或检测存在牛 Igs 的单克隆抗体。使用仅限于检测带有 kappa 轻链的 Igs。

蛋白

蛋白 A 和蛋白 G 具有与哺乳动物 IgG 的 Fc 部分结合的位点。这些蛋白与 IgG 的结合能力因物种而异。一般来说，IgG 与蛋白 G 的亲和力高于与蛋白 A 的亲和力，而且蛋白 G 能与更多物种的 IgG 结合。各种亚类 IgG（尤其是小鼠和人类的亚类 IgG）对蛋白 A 的亲和力比对蛋白 G 的亲和力差异更大。蛋白 L 适用于从细胞培养上清中分离小鼠单克隆抗体，不会受到牛 IgG 的污染。