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二抗

使用Anti-von Wille进行马肉芽组织增生(肉芽增生)的染色

图 1.免疫荧光使用Anti-von Wille进行马肉芽组织增生(肉芽增生)的染色。

二级抗体是与一级抗体或抗体片段(如Fc或Fab区域)结合的多克隆或单克隆抗体。它们通常由探针标记后,可用于检测、纯化或分类等应用。 

我们可提供来自各种宿主的二级抗体。我们的多克隆二级抗体是从宿主动物如小鼠、兔子、山羊和绵羊等的血清中产生的。而我们的单克隆二级抗体是从小鼠杂交瘤细胞克隆产生的。

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利用我们的Antibody Explorer搜索工具,可根据克隆性、应用、物种反应性、结合物、宿主物种和形式,浏览和比较抗体。


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有丝分裂的蝾螈肺细胞的荧光显微照片。使用Monoclonal Anti-^的微管染色。

图 2.有丝分裂的蝾螈肺细胞的荧光显微照片。使用Monoclonal Anti-^的微管染色。

二级抗体的应用

二级抗体适用于许多应用:

  • 免疫纯化
  • ELISA
  • 蛋白质免疫印迹
  • 免疫组化(IHC)
  • 细胞测定
  • 流式细胞术
大鼠视神经冰冻切片用小鼠抗神经丝H抗体和CF568山羊抗小鼠抗体(神经元突起,红色),以及高度交叉吸附的兔抗GFAP抗体和CF488A山羊抗兔抗体(神经胶质细胞,绿色)进行染色。细胞核用 RedDot2 (青色)染色。

图 3.免疫细胞化学。大鼠视神经冰冻切片用小鼠抗神经丝H抗体和CF568山羊抗小鼠抗体(神经元突起,红色),以及高度交叉吸附的兔抗GFAP抗体和CF488A山羊抗兔抗体(神经胶质细胞,绿色)进行染色。细胞核用 RedDot2 (青色)染色。

结合抗体和探针

我们可提供大量的结合抗体产品组合。结合抗体是一种与标签相连的单克隆或多克隆抗体,用于各种各样的分析检测。二级抗体的具体用途取决于其结合的探针类型。探针是辅助各种检测技术的分子。结合二级抗体最常见的检测系统是采用比色法或荧光法的检测。

比色测定通常是基于碱性磷酸酶(ALP)或辣根过氧化物酶(HRP)或其衍生物的使用。生物素-亲和素(链霉亲和素)共轭结合系统常用于放大ALP或HRP的比色信号。最常见的荧光测定是利用异硫氰酸盐荧光素(FITC)、罗丹明或其衍生物、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、青色素(Cy3)或藻红蛋白(R-PE)来进行的。

我们提供与各种比色和荧光标记相连接的结合抗体,可用于检测、纯化、分类和显微镜检查等多项应用。结合抗体在多种宿主动物中产生,故可与广泛的免疫化学试剂相容。对于在研究中需要标记自己的试剂的用户,我们可提供抗体标记试剂盒,以供各种标签(生物素、FITC、CF™标签) 同单克隆和多克隆抗体的结合。

蛋白质A、G和L

来自 金黄色葡萄球菌的蛋白A。来自 链球菌属 的蛋白G。两者都有与哺乳动物IgG的Fc部分相结合的结合位点。这些蛋白质对IgG的亲和力因动物种类而异。蛋白G对大鼠、山羊、绵羊和牛的IgG以及小鼠的IgG1和人的IgG3具有较高的亲和力。蛋白A对猫和豚鼠的IgG具有较高的亲和力(表1)。除了可与IgG的Fc结合位点相结合外,天然蛋白G还可与白蛋白、Igs的Fab区以及细胞膜的结合区相结合,这些可能会导致非特异性染色的发生。我们已通过创造蛋白质重组形式的方式解决了这些问题。重组蛋白G已设计消除了白蛋白结合区,而重组蛋白G′是一种截短的蛋白质,它缺乏对白蛋白、Fab和细胞膜的结合位点,而保留了对Fc的结合位点,因此与其天然形式相比,其对IgG更具特异性。

表中显示了蛋白质A、蛋白质G和蛋白质L对不同物种的结合亲和力/能力。

表1.蛋白质A、G和L对不同物种的结合能力。

蛋白L,来自 大消化链球菌,对来自不同物种的kappa轻链具有亲和力(表 2) 。它可以检测含有kappa轻链的单克隆或多克隆IgG、IgA和IgM以及Fab、F(ab′)2和重组单链Fv(scFv)片段。它也能结合鸡的IgG。注意:像牛、山羊、绵羊和马这样的物种,其Igs几乎只含有lambda链,如果真是这样,它们就不能很好地与蛋白质L结合。

表中显示了蛋白质L对各种kappa轻链的结合亲和力/能力。

表2.与各种免疫球蛋白轻链结合的蛋白L。

检测试剂

蛋白A和G常用作一种通用的、非物种特异性的试剂,来与哺乳动物组织中的一级抗体或表面IgG相结合。蛋白质G推荐可用于包括小鼠和大鼠在内的大多数物种。蛋白A推荐可用于猫和豚鼠。两者均不建议用于对IgA或IgM、Fab片段或禽类的IgG的检测。当与琼脂糖等树脂结合时,蛋白A和蛋白G或可用于血清或腹水中免疫球蛋白的亲和纯化。

蛋白L常用作一种结合哺乳动物或鸟类的一级抗体或所有物种的表面Igs的通用试剂。它特别适用于对Fab、F(ab′)2 片段和重组scFv片段,以及对与Fc受体结合的Igs,或对在牛Igs存在下的单克隆抗体的检测。其使用仅限于检测带有kappa轻链的Igs。

树脂

蛋白A和蛋白G具有对哺乳动物的IgG的Fc部分的结合位点。这些蛋白质对IgG的结合能力因物种而异。一般来说,IgG对蛋白G的亲和力高于蛋白A,且蛋白G可以结合来自更广泛物种的IgG。各种不同的IgG亚类,尤其来源于小鼠和人的,其对蛋白A的亲和力变化差异大于蛋白G。因此,蛋白A可用于从某些物种中制备同型的纯IgG。蛋白L适合于从无牛的IgG污染的细胞培养上清液中分离小鼠单克隆抗体。

HeLa细胞用小鼠抗微管蛋白抗体和CF488A山羊抗小鼠二级抗体(微管,绿色)染色。肌动蛋白丝用CF640R鬼笔环肽(紫色)染色。细胞核用DAPI(蓝色)复染。

图 4.CF™ 染料HeLa细胞用小鼠抗微管蛋白抗体和CF488A山羊抗小鼠二级抗体(微管,绿色)染色。肌动蛋白丝用CF640R鬼笔环肽(紫色)染色。细胞核用DAPI(蓝色)复染。

CF™ 染料标记抗体

CF™ 染料是一系列高水溶性荧光染料,跨越可见光和近红外光谱,用于标记抗体。CF™染料由科学家使用破性化学物质开发,经过合理的染料设计,其亮度、耐光性和颜色选择可与其他商业染料的质量相媲美。

我们可提供经高度验证的且由CF™ 染料标记的二级抗体,并根据物种的不同,准备了各种品种供您选择。




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