啤酒中的二氧化硫含量测定含量

使用埃尔曼试剂光度法测定亚硫酸盐

有多种分析方法可检查是否符合上述限值。欧洲啤酒酿造协会 (EBC) 主张采用蒸馏法定量分析，然而此法需要大量时间投入，很难进行快速测定。⁵ EBC和美国酿造化学家协会（ASBC）提倡用另一种方法测定啤酒中的二氧化硫，即所谓的 p‑玫瑰苯胺法。这种方法的缺点是使用有毒物质，甚至致癌物质，比如 p-玫瑰苯胺、甲醛和氯化汞。^6,7

Spectroquant^® 亚硫酸盐测试盒使用光度 DTNB 法的，较以上方法快速且精确，具有不使用任何致癌化学品的额外优势。

亚硫酸盐测试方法

分析方法

样品制备

使用pH计，用氢氧化钠溶液调节 20 mL 新鲜冷(4–8 °C)啤酒pH约至 6.5–7.5。为避免 SO₂ 被空气中的氧气氧化，此过程须快速进行。分析前无需使样品达到特定温度。为避免错误结果，请使用 MQuant^® 亚硫酸盐测试盒检查亚硫酸盐含量。SO₃^2-含量超过 60.0 mg/L 的样品必须使用分析用水或蒸馏水稀释。

测量

调零：

建议在每个新的工作日用测量样品和空白样的同一 10-mm 矩形比色管对系统调零。有关如何将系统归零的详细信息，请参阅仪器手册。

空白样：

在测量样品之前，必须先测量空白样。此步骤是抵消啤酒固有颜色所必需的。通过混合 8 mL 分析用水和 2 mL 已调节至 pH 6.5–7.5的样品啤酒，制备空白样。将混合物转移至10-mm 矩形比色管并去除气泡。有关如何测量空白样的详细信息，请参阅仪器手册。

样品测定：

通过 Spectroquant^® 亚硫酸盐测试盒，按检测试剂盒所附包装所附插页说明书中的说明测定二氧化硫浓度。与包装插页说明书中的指示不同，这里的反应时间为 10 分钟。缩短反应时间可能会造成损失。10分钟后，将测定溶液注入相应 10 mm 矩形比色管中，除去气泡置于测试室，然后开始测定（如适用）。

测定结束后，可从仪器屏幕上读取结果。为方便数据处理和管理，可通过Prove Connect to LIMS 软件和/或Prove Connect to Dashboard 软件将Prove 分光光度计测量结果传输至所需平台。如果待测量溶液浑浊，必须在反应时间结束后通过针头式过滤装置（货号见上文）过滤溶液。丢弃最初的几滴滤液。

结果

根据 ASBC Beer-21A 法的参考分析验证测定结果。¹ 此外，针对通过Spectroquant^® 检测试剂盒 和 ASBC 法进行的测定过程，进行加标实验。为此，样品中添加了三种不同浓度的二氧化硫（2, 5, 和 10 mg/l SO₂）。然后根据回收含量计算回收率（RR）。浅色啤酒的结果见 表 1， 深色和浑浊啤酒的结果见 表 2.

*根据 ASCB，报告结果应精确到 mg/L。然而，为了更好的进行比较，这里的结果保留了一位小数。

总结

Spectroquant^® 检测试剂盒和ASBC的p-玫瑰苯胺法测定的结果一致。Spectroquant^® 亚硫酸盐测试盒和ASBC 法的偏差在-1.2 到 1.0 mg/L SO₂之间。所有测定的平均偏差为 0.4 mg/L SO₂，可视为较低。

此外进行了加标实验，评估检测试剂盒的准确性。在浅色啤酒中， Spectroquant^® 测试盒回收率在 90–103%区间。在总计15次加标实验中，只有两个实验的误差超过10%。而ASBC法的结果明显较差：在所有浅色啤酒中，ASBC法测得回收率在83-110%之间。其中有六个加标测试结果误差率大于10%，换言之，总样品的40%的结果误差率大于10%。在 2 mg/L 添加量的“科隆“啤酒中，回收率甚至低于 67%。

在深色和浑浊啤酒中，两种测试方法都受样品基质影响，回收率较低就说明了这一点。在这些类型啤酒中，Spectroquant^® 测试盒显示的回收率平均为77-93%，而ASBC为74-100%。

为避免混浊啤酒或深色啤酒中的二氧化硫含量被判定为过低，建议事先通过标准添加程序（参见文件 "通过标准添加鉴定基质效应"）测试测试套件的适用性，必要时将结果除以校正系数。

校正系数的计算方法如下：

注意：只有当回收率在整个加标浓度范围内处于同一量级时，才可使用校正系数。

如果不是这种情况，检测试剂盒不适合分析相关的啤酒样品。
 

结论

Spectroquant^® 亚硫酸盐测试盒 101746 是分析啤酒中二氧化硫含量的快速精确方法。此方法检测到的亚硫酸盐浓度与ASBC推荐的 p-玫瑰苯胺法测得的浓度相当。在浅色啤酒的加标实验中，Spectroquant^® 亚硫酸盐测试盒与 ASBC 方法相比，甚至显示出更高的准确性。这两种方法在应用于深色啤酒和浑浊啤酒时都表现出基质效应。

总之，与 ASBC 方法相比，Spectroquant^® 亚硫酸盐测试盒具有以下优势：

• 在浅色啤酒中准确性更高，在深色啤酒和浑浊啤酒中准确性相当。
• 由于采用即用试剂，省去了耗时的校准工作，因此分析时间更短。
• 由于不涉及致癌化学物质，因此将潜在的健康风险降至最低。