在连续培养或延长培养中维持细胞系是一种不好的做法,原因如下:
所有这些潜在的风险因素可以通过细胞库系统的实施来尽量降低。这种类型的系统称为分层库存系统或主细胞库系统。在最初进入实验室时,应将新的细胞培养物视为潜在的污染源,例如窝藏细菌、真菌和支原体,并应在检疫条件下进行处理,直至证明此类微生物污染物为阴性)。
获得新的细胞系时,在制备主细胞库之前,应取出 3-5 个作为标记物冷冻。对其中一个安瓿进行支原体测试——如果测试失败,则放弃细胞建库程序。如果细胞通过支原体测试,则解冻其中一个安瓿并培养扩增,根据预期的使用水平获得 0-20 安瓿的主细胞库。每次从主库中解冻安瓿时,应对细胞进行质检测试。这些测试包括细胞计数和活率、支原体和其他微生物质检测试以及细胞系认证。如果细胞未通过测试,则需要重复建库程序。如果细胞通过测试,则可解冻细胞并培养扩增。这些细胞可用于冻存建库,应包括 20-200 个安瓿。这些安瓿可用于培养和实验用途,但在使用前应再次进行质检测试。
应从该主细胞库分配2-3个安瓿用于质检,以确认该库的细胞计数和活率是可接受的,并且该库不含细菌、真菌和支原体。在此阶段,通过STR分析、DNA条形码或SNP分析鉴定主细胞库也十分重要。还需要其他测试,例如病毒筛查。一旦这些测试顺利完成,应该解冻并培养一个来自主细胞库的安瓿以产生一个工作细胞库。这个库的规模将再次取决于所设想的需求水平。在使用培养物进行常规实验或生产之前,还需要进行质量控制测试(细胞计数、活力、验证以及不存在微生物污染物)。
重要说明:通过STR分析、DNA条形码或SNP分析鉴定主细胞库和工作细胞库。
该库系统的实施确保:
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