碱性磷酸酶

碱性磷酸酶（ALP）是一种普遍表达的糖蛋白。这种酶与细胞膜结合。ALP的激活需要必需的辅助因子，例如锌和镁。碱性磷酸酶可催化从磷酸化的各种化合物中除去磷酸基团。来自小牛肠的碱性磷酸酶可水解来自DNA和RNA的5′-单磷酸基团。它还可以水解RNA中的5′-二磷酸和5′-三磷酸基团。因此，肠道ALP是分子克隆常用的酶之一。

可使用这种小牛肠碱性磷酸酶制剂从DNA或RNA和免疫沉淀的RNA样品中去除5′-末端磷酸盐。
注意：11097075001制剂含有高浓度的酶(20 U/μl)，便于大规模实验。10713023001制剂的浓度较低(1 U/μl)，便于小规模实验。

AP是一种含锌酶，每分子含有4个锌原子（Efstradiatis，1977）。

检测条件、+37 °C下，碱性磷酸酶1分钟内水解1 μmol对硝基苯磷酸酯的酶量为1个酶活单位。


注意：据Moessner等报道，5单位碱性磷酸酶（+37 °C，二乙醇胺缓冲液）相当于1单位碱性磷酸酶（+25 °C，甘氨酸/NaOH缓冲液）。

单位换算：约3.6 U（MB级碱性磷酸酶）


[+37 °C, 底物4-NPP，缓冲液二乙醇胺，pH 9.8] = 1 U [+25 °C, 底物4.NPP，甘氨酸缓冲液，pH 10.5]。

体积酶活：11097075001制剂为20 U/μl。 10713023001制剂为1 U/μl。

10713023001：酶溶液(1 U/μl)，溶于储存缓冲液中，pH 7.6 (20 °C)

11097075001：酶溶液(20 U/μl)，溶于储存缓冲液中，pH 7.6 (20 °C)

工作溶液：Storage buffer: 25mM Tris-HCl，1mM MgCl₂，0.1mM ZnCl₂，甘油50％（v/v），pH 7.6（4℃）。
储存条件（工作溶液）：储存缓冲液中的MB级AP稀释液（1至5 U/μl）在2至8°C下可稳定保存17个月。
较高的稀释度（~0.01 U/μl）应每天新鲜配制，并保存在2至8°C。
在克隆过程中防止载体的自我连接
如果线性化载体缺乏5′磷酸，则不能与自身连接或形成含有多个载体拷贝的连环体。因此，连接反应的产物主要则为重组DNA（载体+DNA插入物），而不会是重新连接的质粒。
失活：向反应混合物中加入1/10体积的EGTA，并在+65℃下孵育10分钟。为确保酶完全失活，可通过苯酚/氯仿/异戊醇对混合物进行抽提以除去所有蛋白质。

用于一般实验室用途。