生物来源
Escherichia coli (BL 21/pSR3)
质量水平
方案
100% (SDS-PAGE)
表单
solution
比活
≥20 U/μL
分子量
96 kDa (Single polypeptide chain)
包装
pkg of 1,000 U (10810274001)
pkg of 5,000 U (11487671001)
制造商/商品名称
Roche
技术
DNA sequencing: suitable
Northern blotting: suitable
Southern blotting: suitable
颜色
colorless
pH值（酸碱度）
~7.9 (39 °F)
溶解性
water: miscible
适用性
suitable for molecular biology
UniProt登记号
应用
genomic analysis
life science and biopharma
异质活性
Endonucleases, none detected (up to 30U using Lamda-DNA)
Endonucleases, none detected (upto 30U using MWM III-DNA )
Nicking activity, none detected (up to 30U using pBR322-DNA)
RNase, none detected (up to 30U using MS II- RNA )
储存温度
−20°C
基因信息
Escherichia coli ... rpoB(948488)
一般描述
利用该系统能够获得均匀标记的单链RNA。转录物可以用生物素或DIG-11-UTP标记，或者使用[α-32P]或[α-35S]标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。
内容物：
内容物：
- SP6 RNA聚合酶，≥20 U/μl，溶于缓冲液，pH 7.9
- 转录缓冲液，10倍浓缩
特异性
启动子特异性
SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性，仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA（例如pSPTBM20；pSPTBM21）。
热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH 8.0）和/或加热至65℃来终止反应。
SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性，仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA（例如pSPTBM20；pSPTBM21）。
热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH 8.0）和/或加热至65℃来终止反应。
应用
SP6 RNA聚合酶能够以转录SP6启动子下游的克隆DNA为模板，转录合成相应的RNA。可以用标记的NTP进行合成，获得高度标记的RNA。合成的RNA可用于许多应用，包括：
- RNA或DNA印迹技术
- 原位 杂交
- RNA酶保护研究：由酶合成的转录物可用作前体RNA，以研究RNA剪接和加工。
- 在转录反应期间，通过在GTP或ATP上过量添加m7GpppG或m7GpppA而在 体外 合成加帽RNA。将得到的反义RNA引入细胞，可抑制相应基因的表达。
- 合成反义RNA探针
质量
测试缓冲液
40 mM Tris-HCl，pH 8.0 (+20°C)，6 mM MgCl2，10 mM二硫苏糖醇，2 mM亚精胺，pH约为8.0 (+20°C).
无核酸内切酶
1.将1 μgλDNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无λDNA降解。
2.将1 μg λDNA的Eco RI/Hind III片段与SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表带型无变化。
无切割活性
将1 μg pBR322 DNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无超螺旋结构解旋。
无RNA酶
将4 μg MS2 RNA和SP6 RNA聚合酶溶于50μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无MS2 RNA降解。
在转录分析中的性能
使用SP6/T7转录试剂盒（目录号10 999 644 001）对SP6 RNA聚合酶进行功能测试。使用0.5 μg pST18 neo DNA进行标准检测，用Eco RI酶切并使用50 mCi [alpha-32P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)]标记，20分钟内的掺入率给出>50%的输入放射性。
40 mM Tris-HCl，pH 8.0 (+20°C)，6 mM MgCl2，10 mM二硫苏糖醇，2 mM亚精胺，pH约为8.0 (+20°C).
无核酸内切酶
1.将1 μgλDNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无λDNA降解。
2.将1 μg λDNA的Eco RI/Hind III片段与SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表带型无变化。
无切割活性
将1 μg pBR322 DNA和SP6 RNA聚合酶溶于25μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无超螺旋结构解旋。
无RNA酶
将4 μg MS2 RNA和SP6 RNA聚合酶溶于50μl测试缓冲液，在+37℃下一起孵育4小时。酶单位数> 30 U代表无MS2 RNA降解。
在转录分析中的性能
使用SP6/T7转录试剂盒（目录号10 999 644 001）对SP6 RNA聚合酶进行功能测试。使用0.5 μg pST18 neo DNA进行标准检测，用Eco RI酶切并使用50 mCi [alpha-32P] CTP, [400 Ci/mmol (15 TBq/mmol)]标记，20分钟内的掺入率给出>50%的输入放射性。
产品规格
杂交探针的合成： SP6 RNA聚合酶能够高效生产均匀标记的RNA。这种标记RNA可用作Southern、Northern和斑点印迹以及原位杂交的杂交探针。
合适的标记物：转录物可以用生物素-16-UTP、DIG-11-UTP或荧光素-12-UTP进行非放射性标记。还可以用 [a-32P]- 或[a-35S]-标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。
注意：罗氏拥有10倍浓缩的RNA标记混合物，专为DIG-、生物素和荧光素标记而设计。这些混合物与SP6 RNA聚合酶配合良好。
合适的标记物：转录物可以用生物素-16-UTP、DIG-11-UTP或荧光素-12-UTP进行非放射性标记。还可以用 [a-32P]- 或[a-35S]-标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。
注意：罗氏拥有10倍浓缩的RNA标记混合物，专为DIG-、生物素和荧光素标记而设计。这些混合物与SP6 RNA聚合酶配合良好。
单位定义
一个酶活性单位是在+37°C下，在60分钟内向酸可沉淀的RNA产物中掺入1 nmol CMP所需的酶活性。
体积活性：≥20 U/μl
体积活性：≥20 U/μl
制备说明
活化剂：BSA/精胺
储存及稳定性
保存于密闭容器内，置于干燥通风处
其他说明
仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- SP6 RNA Polymerase, in buffer, pH 7.9 ≥20 U/μl
- Transcription Buffer 10x concentrated
警示用语：
Warning
危险声明
危险分类
Eye Irrit. 2
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
闪点(°F)
does not flash
闪点(°C)
does not flash
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