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灵活的多重流式细胞分析：ColorWheel®抗体和染料

流式细胞分析可帮助研究人员快速分析异质细胞群中的单个细胞，屡屡应用于免疫学、免疫肿瘤学、神经生物学等众多研究领域。多重流式细胞分析可利用各种荧光基团或染料分析多项细胞特性，是极具动态性的强大流式分析工具。但在多色分析方案设计和放大过程中，研究人员面临诸多考验。我们的ColorWheel®流式抗体及染料应运而生，在保证实验成功率的同时，又可助您简便灵活地开展流式细胞分析方案。

何为多重流式细胞分析？

多重或多色流式细胞分析技术可在微孔板的单个孔内，用荧光标记的不同抗体识别细胞表面和内部的不同抗原，之后再通过流体动力学聚焦法使细胞形成单列液流流过激光束，从而采集每个细胞的多项参数。只要给每个抗体添加独有的荧光基团或染料标记，即可通过细胞仪激光束照射标记后激发的发射光线，区分和鉴定目标细胞亚群1 。

构建多重流式细胞分析Panel时需要考虑的因素

同时分析多种抗原为开展日益复杂的实验铺平了道路，常规多重流式实验一般使用相同的抗原集合，常称为panel（组合）。构建多重流式细胞分析panel时，研究人员必须同时考虑很多因素：

ColorWheel<sup>®</sup>抗体及染料有助于解决多重流式细胞分析 难题，可妥善调和多重流式细胞分析流程难题，包括仪器检测范围、抗原表达/染料亮度，以及可用的抗体-染料组合。
  • 仪器检测范围：仪器上的可用激光波长必须与抗体标记的荧光基团或染料兼容，而后者的检测又进一步受到滤光片的限制。
  • 抗原表达、细胞群丰度和染料亮度：一般而言，最好的策略是高强度染料与个数稀少的细胞群或低表达水平的抗配对组合2。当然也有例外，因而为了取得有效结果，深入了解实验中的抗原、细胞群和染料必不可少。
  • 可选的抗体-染料组合：查找针对目标抗原的特异性抗体，其标记染料要与使用者的仪器兼容，而且供应商已验证过该抗体可用于流式细胞分析。如果这种组合暂无在售产品，可改为使用二抗进行间接染色。如此又会带来种属交叉反应、高背景噪音问题，最终导致实验更加复杂——尤其是对于多重分析应用。

构建新的多重分析实验时，平衡这些因素变得极为复杂，最终需要耗费大量的时间和精力。而扩大现有panel解决新问题又让本已令人却步的任务更添复杂。研究人员必须找到一种经过流式细胞分析验证、针对目标抗原的抗体，标记的染料要适合抗原表达水平又不能与已被占用的仪器激光检测范围重合，并且与panel中现有的抗体-染料配对不能发生严重的光谱重叠。 

构建多色流式细胞panel的详情可查看我们的多色流式细胞术指南。

采用ColorWheel®抗体和染料进行多重检测

在解决多重流式细胞分析难题时，ColorWheel®抗体及染料的简便和灵活可突破流式限制，解锁更自由的多重分析方案设计。依靠专有技术，任一ColorWheel®抗体与ColorWheel®染料可任意组合配对。所有ColorWheel®抗体及染料都经过流式细胞分析验证，并优化为1:1（体积/体积）的工作比率，方便轻松组合抗体-染料配对。仅需3个步骤、5分钟手动操作时间，用户就能建立针对目标抗原的、适配所用仪器的最优抗体-染料组合panel，详情参见我们的ColorWheel®流式试剂简单3步法制备方案。

与ColorWheel® AF450、AF488、PE和APC染料分别配对的ColorWheel® CD44、CD4、CD45RA和CD3抗体的细胞相对数量。同时运行多重流式细胞分析。

图 1.与ColorWheel® AF450、AF488、PE和APC染料分别配对的ColorWheel® CD44、CD4、CD45RA和CD3抗体同时运行多重分析。

考虑以下情况：

增加一个新靶标扩大现有的多重分析方案

问题：新靶标仅有标记1种染料的在售抗体，但该染料在现有多色分析方案已用于标记另1种抗体。

ColorWheel®解决方案：  无需研究者被迫在两种靶标中二选一，ColorWheel®抗体和染料的混合配对能力允许用户自如选择靶标，只需用任何一种未用过的仪器兼容性ColorWheel®染料替换分析方案中已有的抗体标记染料即可。建立ColorWheel®抗体和染料panel后，多重流式细胞分析术筛选分析方案将变得格外具有应用“前景”，多色panel中的现有染料总能与新的或现有的抗体重新配对。 

建立新的多重分析方案，分析不同表达水平的抗原

问题：  为不同抗原表达水平的抗体配对亮度适中的染料需要耗费大量时间和精力。

ColorWheel®解决方案：用户友好的ColorWheel®家族允许用户分别订购靶标和兼容所用仪器的染料。随后依靠ColorWheel®抗体及染料的灵活性，只需在实验台上根据需要将靶标抗体与染料混合配对即可得到所需流式抗体，从而解除流式细胞仪的兼容性限制。另外，ColorWheel®产品具有5年以上的增强稳定性，仪器兼容染料可长期备货。

具体如何使用ColorWheel®产品，请参阅我们的ColorWheel®流式方案。或者也可按照我们的适合的荧光染料选择指南，为您的panel选择适合的荧光染料。

在保证实验成功率的同时，保持灵活性：与直标抗体对比

ColorWheel®抗体及染料可在维持顶级数据质量的同时，提高试剂的灵活性。运行多重分析方案时，ColorWheel®抗体的性能与传统的直接标记一抗相当（图2）。 

直方图显示针对相同抗原靶标的，ColorWheel®染料（AF450、AF488、PE和APC）配对的ColorWheel®抗体与传统的直标一抗检测的细胞相对数量对比。同时运行多重流式细胞分析。

图 2.针对相同靶标时，ColorWheel®染料和ColorWheel®抗体的组合与传统直接标记一抗的对比。同时运行多重分析。

关注我们，发现更多惊喜

只需扫描每个ColorWheel®产品标签上的QR二维码，进入我们的ColorWheel®数字中心，即可与我们随时保持联系。在此您将发现ColorWheel®系列的最新产品，以及技术、应用相关的信息和资源等。

我们的ColorWheel®抗体根据客户需求进行设计和测试的，并享受抗体效果保证(Antibody Guarantee)支持。此外，如欲亲身体验ColorWheel®抗体和染料产品，请先咨询有关试用优惠的信息。

ColorWheel®相关产品

需要同时拥有ColorWheel®抗体和ColorWheel®染料，才能进行流式细胞分析。抗体和染料需分别购买。

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参考文献

1.
Maciorowski Z, Chattopadhyay PK, Jain P. 2017. Basic Multicolor Flow Cytometry. Current Protocols in Immunology. 117(1): https://doi.org/10.1002/cpim.26
2.
Maecker HT, Frey T, Nomura LE, Trotter J. 2004. Selecting fluorochrome conjugates for maximum sensitivity. Cytometry. 62A(2):169-173. https://doi.org/10.1002/cyto.a.20092
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