抗Cullin-4A

Cullin-4A（UniProt Q13619；也称为 CUL-4A）由人 CUL4A 基因（基因 ID 8451）编码。CUL-4A 属于疏水蛋白的 cullin 家族，其功能是 E3 泛素连接酶复合物的支架成分。CUL-4A 与 DNA 损伤结合蛋白 1（DDB1）和 ring of cullins（ROC1）相互作用以组装成 E3 复合物，其中 DDB1 作为 CUL4 的连接蛋白，并通过与一系列 WD40 蛋白结合将底物募集到 CUL4-ROC1 催化核心上。已知至少有 90 种 DDB1 结合 WD40（DWD）蛋白（对于 Ddb1 和 Cul4 相关因子也称为 DCAF，对于 CUL4 和 DDB1 相关 WD40 重复序列也称为 CDW），表明 CUL4-ROC1 连接酶复合物有大量潜在的底物。CUL4-ROC1 E3 连接酶复合物在细胞周期、DNA 复制、基因组稳定性、造血作用和精子形成中起重要作用。CUL-4A 在睾丸和脾脏中高表达，而在肺、肝、胸腺、小肠和肌肉组织中低表达。CUL4A 基因扩增已在多种肿瘤中得到证实，包括肝细胞癌（HCC）、鳞状细胞癌和肾上腺皮质癌。据报道，CUL4A 沉默可抑制 HCC 细胞的运动并逆转其上皮-间质转化（EMT）趋势。

观测值〜80 kDa。长时间曝光后也观察到约 82 kDa NEDDylated 形式（NEDD8 修饰的）。计算得出的分子量：87.68 kDa在某些裂解液中可能会观察到未表征的条带。

对应于人 Cullin-4A 剪接的同工型 1 N 末端序列的合成线性肽。

表位：N端

使用该兔多克隆抗 Cullin-4A（货号 ABS1584，经过验证可用于免疫复合酶测定、免疫沉淀和蛋白质印迹）检测 Cul4A 。

研究类别
信号传导

蛋白质印迹分析：一个代表性批次以 1：500 的稀释度在 10 µg HeLa 细胞裂解物中检测到 Cullin-4A。

酶测定：在泛素（Ub），E1 & E2 酶存在下，一个代表性批次从 HeLa 细胞裂解液免疫沉淀了 cullin-4A 复合物，用于随后的体外 Myc-CDT1 泛素化反应。在进行 IP 之前，RNAi 介导的 DDB1（而非 DDB2）的敲低阻止了 cullin-4A 免疫复合物依赖性泛素化反应的成功（Hu, J., et al. (2004).Nat. Cell Biol. 6(10):1003-1009).

免疫沉淀分析：代表性批次从人 BT474、U2OS、HEK293T 和 HeLa 细胞中免疫沉淀未修饰的和 NEDD8 修饰的（NEDDylated）内源性 cullin-4A 以及与其结合的蛋白（包括 CAND1、CSN1-8、DDB1 和 VprBP）（McCall, C.M., et al. (2008).Mol.Cell.Biol. 28(18):5621-5633; Hu, J., et al. (2004).Nat. Cell Biol. 6(10):1003-1009）。

免疫沉淀分析：一个代表性批次在 HEK293T 细胞中免疫沉淀了 Myc3-cullin-4A。仅在存在外源表达的 T7-DDB1 的情况下，Myc-CDT1 与 Myc3-cullin-4A 免疫共沉淀。RNAi 介导的 CAND1 敲低增强了 T7-DDB1 co-IP，而 DDB1 敲低则增强了 myc-CAND1 co-IP（Hu, J., et al. (2004).Nat. Cell Biol. 6(10):1003-1009）。

蛋白质印迹分析：一个代表性批次在全细胞裂解液（U2OS、WI-38/E6、HeLa）或染色质部分（HeLa 和 HCT116），在 VprBP 和 cullin-4A 免疫沉淀物（U2OS）中，以及在通过凝胶过滤从 HeLa S3细胞裂解液中分离的 VprBP、DDB1、CDT1 和 CSN5 的复合物中检测到未修饰的和 NEDD8 修饰的（NEDDylated）内源性 cullin-4A S3（McCall, C.M., et al. (2008).Mol.Cell.Biol. 28(18):5621-5633）。

蛋白质印迹分析：一个代表性批次在 HEK293T 和 HeLa 细胞裂解液，以及表达转染的 T7-DDB1 和 Myc-CAND1 的 HEK293T 细胞的 T7-tag 和 Myc-tag 免疫沉淀物中检测到未修饰的和 NEDD8 修饰的（NEDDylated）内源性 cullin-4A（Hu, J., et al. (2004).Nat. Cell Biol. 6(10):1003-1009）。

该多克隆抗体针对人 Cullin-4A 剪接同工型 1 N 末端序列（在剪接同工型 2 中不存在）产生。该多克隆抗体可以检测 NEDDylated 和 NEDDylated Cullin-4A（McCall, C.M., et al. (2008).Mol.Cell.Biol. 28(18):5621-5633; Hu, J., et al. (2004).Nat. Cell Biol. 6(10):1003-1009）。

亲和纯化。

在含 0.1 M Tris-甘氨酸（pH 7.4）150 mM NaCl 和 0.05％ 叠氮化钠的缓冲液中的纯化的兔多克隆抗体

自收到之日起，在 2-8°C 条下可稳定保存 1 年。

通过蛋白质印迹对 Jurkat 细胞裂解液进行了评估。

蛋白质印迹分析：该抗体以 1：500 的稀释度在 10 µg Jurkat 细胞裂解物中检测到 Cullin-4A。

浓度：请参考特定批次的数据表。

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