ChemiSCREEN FPR1甲酰肽受体1膜制剂

FPR1是一种G_i偶联的GPCR，可结合并被短的N-甲酰肽（例如N-甲酰基-Met-Leu-Phe（fMLF）激活。 N-甲酰肽通常衍生自细菌并介导宿主将白细胞（其高度表达FPR1）募集到细菌性感染位点（Gao et al., 1999）。 此外，FPR1在脉管系统、分泌上皮细胞、神经元和其他组织中表达（Becker et al., 1998）。 还发现其他配体，例如线粒体编码的甲酰肽、淀粉样蛋白和病毒衍生肽，可激活FPR1和/或相关GPCR，并且在各种淀粉样变性病、阿尔茨海默′病和HIV的病理生理学中可能是重要的（Le et al., 2002）。 合成的六肽配体WKYMVm也已证明与FPR1结合（Le et al., 1999）。 Chemicon′膜制剂是由我们专有的稳定重组细胞系制成的粗制膜制剂，可确保高水平的GPCR表面表达；因此，它们是筛选FPR1及其配体拮抗剂的理想HTS工具。 对于[¹²⁵I]-WKYMVm，膜制剂的Kd为0.39 nM。 使用5μ g/孔的FPR1膜制剂和0.5 nM[¹²⁵I]-WKYMVm，可获得大于20倍的信背比；使用1.25和2.5μ g/孔的FPR1膜制剂，分别获得大于9倍和15倍的信背比。

人FPR1

放射性配体结合测定和GTPγS结合。

GPCR 类别：A

蛋白质靶标：FPR1

靶标亚家族：N-甲酰肽

培养条件
推荐的测定条件：将膜与放射性配体和未标记竞争剂（检测浓度见图1和2）在非结合96孔板的结合缓冲液中混合，并培养1-2小时。过滤前，用0.33%聚乙烯亚胺包被GF/C 96孔滤板30分钟，然后用50mM HEPES，pH值7.4，0.5%BSA洗涤。 将结合反应物转移到滤板上，并用洗涤缓冲液洗涤3次（每次洗涤每孔1 mL）。 将平板干燥并计数。

结合缓冲液：50 mM Hepes，pH值7.4，5 mM MgCl2，1 mM CaCl2，0.2%BSA，过滤并储存在4°C

放射性配体：[125I] WKYMVm （Perkin Elmer# NEX386）

洗涤缓冲液：50 mM Hepes，pH值7.4，500mM NaCl，0.1%BSA，过滤并储存在4°℃。 一个小瓶包含足以进行至少200次测定（单位）的膜，其中单位是产生大于10倍的信号：背景的膜量，具有在0.5 nM的125I标记的WKYMVm

包装缓冲液中的液体：50 mM Tris pH值7.4、10%甘油和1%BSA，不含防腐剂。包装方法：将膜蛋白在1 ml包装缓冲液中调节至0.5 mg/ml，快速冷冻，并保存在-80°C下。

在 -70°C 下可冷冻保存长达 2年。 请勿冷冻和解冻。

质量标准：

FPR1膜制备的信号：背景和特异性结合

	5 µ g/孔
信号：背景	17.9
特异性结合（cpm）	17837

Bmax：5.65 pmol/mg
Kd： 0.39 nM

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