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一般描述
经5′端的胞嘧啶甲基化为鸟嘌呤对几个真核基因的表达具有深远的影响(Bird, 1992)。在正常细胞中,甲基化主要发生在CG贫乏区域,而富含CG的区域(称为CpG岛)则保持未甲基化状态。在永生化和转化的细胞(Antequera, 1990)中,正常未甲基化的CpG岛的异常甲基化已被报道为一个相对频繁的事件,并且与人类癌症(Merlo, 1995)中已定义的肿瘤抑制基因的转录失活有关。O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)是表现出特征性高甲基化的基因的一个例子。
甲基化特异性PCR(MSP)是一种利用少量DNA灵敏检测异常基因甲基化的新技术(Herman,1996)。该过程采用最初的亚硫酸氢盐反应来修饰DNA,然后使用设计用于区分甲基化和未甲基化DNA的特异性引物进行PCR扩增。
甲基化特异性PCR(MSP)是一种利用少量DNA灵敏检测异常基因甲基化的新技术(Herman,1996)。该过程采用最初的亚硫酸氢盐反应来修饰DNA,然后使用设计用于区分甲基化和未甲基化DNA的特异性引物进行PCR扩增。
应用
CpG WIZ MGMT扩增试剂盒的组件包括DNA样品亚硫酸氢盐修饰后PCR扩增所需的组件。提供足够的试剂来分析25个样品。
技术原理
使用CpGenome DNA修饰试剂盒(目录号S7820)或CpGENOME 快速DNA修饰试剂盒(目录号S7824)可促进初始亚硫酸氢盐反应,而CpG WIZ MGMT扩增试剂盒包含所需的试剂用于基因特异性PCR扩增反应。
使用CpGenome DNA修饰试剂盒(目录号S7820)或CpGENOME 快速DNA修饰试剂盒(目录号S7824)可促进初始亚硫酸氢盐反应,而CpG WIZ MGMT扩增试剂盒包含所需的试剂用于基因特异性PCR扩增反应。
组分
CpG WIZ MGMT扩增试剂盒的组件包括DNA样品亚硫酸氢盐修饰后PCR扩增所需的组件。提供足够的试剂以使用适当的对照品分析25个样品。
U引物组5 μM 每个引物(25X)35 μL(中性帽)90513 -15°C至-25°C
M引物组5 μM 每个引物(25X)35 μL(红色帽)90514 -15°C至-25°C
W引物组5 μM 每个引物(25X)35 μL(绿色帽)90515 -15°C至-25°C
U对照DNA0.1 μg/μL 50 μL(白色帽)90393 -15°C至-25°C
M对照DNA0.1 μg/μL 50 μL(红色帽)90394 -15°C至-25°C
W对照DNA0.05 μg/μL 50 μL(绿色帽)90395 -15°C至-25°C
通用10X PCR缓冲液265 μL(蓝色帽)90396 -15°C至-25°C
U引物组5 μM 每个引物(25X)35 μL(中性帽)90513 -15°C至-25°C
M引物组5 μM 每个引物(25X)35 μL(红色帽)90514 -15°C至-25°C
W引物组5 μM 每个引物(25X)35 μL(绿色帽)90515 -15°C至-25°C
U对照DNA0.1 μg/μL 50 μL(白色帽)90393 -15°C至-25°C
M对照DNA0.1 μg/μL 50 μL(红色帽)90394 -15°C至-25°C
W对照DNA0.05 μg/μL 50 μL(绿色帽)90395 -15°C至-25°C
通用10X PCR缓冲液265 μL(蓝色帽)90396 -15°C至-25°C
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