一般描述
cDNA末端快速扩增(RACE)是一种用于从部分已知序列快速获得全长cDNA的常用技术。5′/3′ RACE试剂盒包含转录物逆转录酶和重组末端转移酶。转录子逆转录酶可转录全长cDNA，用于高达14 kb的55′或3′ cDNA片段的高灵敏度和快速扩增。其具有热稳定性（高达+ 65°C），适用于具有高二级结构的高GC含量模板。使用转录物逆转录酶可以实现高灵敏度，从而实现高效的cDNA合成和长RACE产物的获得。重组末端转移酶用于将同聚A尾添加至cDNA的3′末端。poly(A)+尾可降低oligo(dT)-锚定引物所产生的不适当截短的可能性，并且可以克服相较于G / C来说较弱的A / T杂交问题.此外，在oligo(dT)-锚定引物可以与内部位点进行杂交并且截短扩增产物之前，需要一段更长的A残基片段。使用基因特异性引物和oligo(dT)-锚定引物通过PCR扩增加尾cDNA。使用嵌套的特异性引物和PCR锚定引物，通过第二次PCR进一步扩增所获cDNA，从而将RACE产物克隆到合适的载体中以用于后续研究。
特异性
热灭活：终端转移酶：70°C，10分钟
转录物逆转录酶：85°C，5分钟
转录物逆转录酶：85°C，5分钟
应用
第二代5′/3′ RACE试剂盒适用于
- RNA分子的结构和表达研究
- 生成全长cDNA
- 从低拷贝RNA信使中分离和鉴定5′或3′末端
- 第一链cDNA合成
- 扩增和进一步克隆稀有mRNA
- 与外显子捕获方法结合使用
- RACE反应产物无需克隆即可直接测序
特点和优势
- 强大的性能: 重组转录物逆转录酶能够在困难的二级RNA结构区域上向前移动。
- 方便：RNA的5′ 或3′ 末端的功能和表达研究可以用相同的试剂盒进行。
- 可靠： 使用重组末端转移酶获得的dA加尾cDNA降低了不当截短的概率。
- 可重复：具有非3′ dT的寡聚dT-锚定引物能够确保与poly (A)尾的内端正确结合。
- 产生长片段：使用转录物逆转录酶生成长达14kb的cDNA。
对照反应包括使用对照引物neo1/rev将对照RNA转录成第一链cDNA。使用对照引物neo2/rev和neo3/for进行cDNA的扩增，以获得157bp的PCR产物。使用dATP对纯化的cDNA进行加尾。用寡聚dT-锚定引物和对照引物neo2/rev进行加尾cDNA的扩增，以获得293bp的PCR产物。
包装
1个试剂盒包含12个组分
其他说明
仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。
仅试剂盒组分
产品编号
说明
- cDNA Synthesis Buffer 5x concentrated
- Transcriptor Reverse Transcriptase 20 U/μl
- Deoxynucleotide Mix
- dATP, pH 7.5 (20 °C)
- Reaction Buffer 10x concentrated
- Terminal Transferase, recombinant
- Control neo-RNA 1 ng/μl
- Oligo dT-Anchor Primer
- PCR Anchor Primer
- Control Primer neo1/rev primer 12.5 μM
- Control Primer neo2/rev primer 12.5 μM
- Control Primer neo3/for primer 12.5 μM
查看所有结果 (12)
储存分类代码
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
闪点(°F)
does not flash
闪点(°C)
does not flash
我们的科学家团队拥有各种研究领域经验，包括生命科学、材料科学、化学合成、色谱、分析及许多其他领域.
联系客户支持