ββ-半乳糖苷酶 ELISA试剂盒

来自大肠杆菌的β-Gal（β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.23）可通过β-Gal ELISA进行特异性检测。来自大肠杆菌的β-Gal酶已被包含在试剂盒中用于绘制标准品校准曲线，并提供有通过免疫检测确定的批次特异性内容物数据。

内容物：

• β-Gal酶（来自大肠杆菌）
• 抗-β-Gal-地高辛
• 抗-DIG-过氧物酶
• POD底物
• 底物增强剂
• 洗涤液浓缩液，10x
• 样品缓冲液
• 裂解液浓缩液，5x
• 两块微孔板，带有12组8孔的条形框架，预包被有抗-β-Gal
• 自粘板盖箔（3）

仅用于研究目的。不用于诊断程序。
β-Gal ELISA 用于定量测定转染了携带β-Gal编码报告基因的质粒的真核细胞中的β-Gal表达。该β-Gal ELISA还可用于通过框内克隆至合适的β-Gal编码DNA构建体中而产生的融合蛋白的定量。

β-Gal ELISA 基于夹心 ELISA 原理。裂解转染细胞后，将细胞提取物（含β-Gal酶）加入微孔板的孔中，微孔板预先包被 β-Gal多克隆抗体（抗β-Gal）。细胞提取物中包含的所有β-Gal均与结合在微孔板表面的抗β-Gal抗体结合。然后，加入地高辛标记的抗β-Gal抗体（抗β-Gal-DIG），并与β-Gal结合。下一步，加入与过氧化物酶结合的地高辛抗体（抗-DIG-POD），并与地高辛结合。最后一步，加入过氧化物酶底物 ABTS。过氧化物酶催化底物裂解，产生有色反应产物。使用 ELISA 酶标仪测定样品的吸光度，吸光度与细胞提取物中存在的β-Gal级别直接相关。使用底物增强剂的 ABTS 可增强检测的灵敏度。

在转染的哺乳细胞中启动子活性的研究一般是通过将启动子序列连接到一个编码易于检测的“报告基因”蛋白的基因上，如氯霉素乙酰转移酶 (CAT)、β-半乳糖苷酶（β-Gal）或荧光素酶 (Luc)。
编码了β-半乳糖苷酶（β-Gal）的大肠杆菌lacZ基因已成为用于转染实验的标准报告子基因之一。传统上，β-Gal的活性是通过使用比色测定法以邻硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）或氯酚红β-D-吡喃半乳糖苷（CPRG）作为底物而进行测量的。这些检测的灵敏度不足以检测少量的酶。另一个缺点在于，为了能够区分内源性溶酶体β-Gal和细菌酶的活性，比色测定必须在碱性pH下进行。相反，β-Gal ELISA可特异性检测细菌酶，但不能检测类似的溶酶体β-半乳糖苷酶。

该检测对于来自大肠杆菌的β-Gal（β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.23）是具有特异性的。它不会与来自真核的溶酶体β-半乳糖苷酶发生交叉反应。

测定时间：约4小时
样品材料：细胞提取物
灵敏度：≥30 pg/ml（6 pg/孔）
标准品：来自大肠杆菌的β-Gal已被包含在试剂盒中用于绘制标准品校准曲线，并提供有通过免疫检测确定的批次特异性内容物数据。

1 个试剂盒包含 10 种组份。

工作浓度：向每条泳道转移40至100 ng的标记RNA分子量标记I，或20至50 ng的RNA分子量标记II或III，以产生清晰可见的条带图样。
注：需要对琼脂糖胶的泳道（插槽）大小进行考虑，上样100 ng的RNA标记I以及50 ng的RNA标记II或III。
工作溶液：β-Gal酶储备液（溶液1）

用0.5 ml双蒸水将冻干品（瓶1）进行重悬。
按照下方描述的批次特异性信息对终浓度进行计算。

抗-β-Gal-DIG（溶液2）

用0.5 ml双蒸水将冻干品（瓶2）进行重悬（终浓度：50 μg/ml）。

抗-β-Gal-DIG，工作稀释液（溶液2a）

如需制备工作浓度，可用样品缓冲液（溶液7）稀释重悬后的抗-β-Gal-DIG溶液（50 μg/ml）至0.5 μg 抗β-Gal-DIG/ml样品缓冲液的终浓度（例如，对于50个孔采用 100 μl的重悬后抗-β-Gal-DIG溶液 9.9 ml的样品
缓冲液（瓶7））。在使用前新鲜制备！不可储存！

抗-DIG-POD（溶液3）

用0.5 ml双蒸水将冻干品（瓶3）进行重悬（终浓度20 U/ml）。
注：不要冷冻！不要加入叠氮化钠作为防腐剂，因其会抑制过氧化物酶的活性！

抗-DIG-POD，工作稀释液（溶液3a）

如需制备抗-DIG-POD工作稀释液，用样品缓冲液（溶液7）将重悬后的抗-DIG-POD溶液（20 U/ml）稀释至150 mU/ml的终浓度（例如，对于50个孔采用75 μl的重悬后抗-DIG-POD溶液以及9.925 ml样品缓冲液（瓶7）。在使用前新鲜制备！不可储存！

带有增强剂的ABTS底物溶液（溶液5）

在15至25 °C下向每ml的ABTS底物溶液（溶液4）中加入1 mg的底物增强剂并搅拌混匀。
仅能稳定4小时，仅在使用前进行制备！

洗涤液，1x（溶液6）

如需制备即用型洗涤液，将1份的10x洗涤液（瓶6）与9份的双蒸水混合。

样品缓冲液（溶液7）

即用型溶液。使用前充分混匀。

裂解液，1x（溶液8）

将1份的5x 裂解液浓缩液（瓶8）与4份的双蒸水混匀。
注：每6 cm培养皿需要1 ml的该溶液。
储存条件（工作溶液）：β-Gal酶储备溶液（溶液1）
2到8°C 1周或-15至25°C 12个月
抗-β-Gal-DIG（溶液2）
2到8°C 6个月或-15至25°C 分装后12个月
抗-β-Gal-DIG工作稀释液（溶液2a）
使用前新鲜制备！不可储存！
抗-DIG-POD（溶液3）
2到8°C 6个月
抗-DIG-POD，工作稀释液（溶液3a）
使用前新鲜制备！不可储存！
POD底物（溶液4）
储存在2到8°C至试剂盒上标注的失效日期。
带有增强剂的ABTS底物溶液（溶液5）
仅可稳定4小时，仅在使用前进行制备！
洗涤液，1x（溶液6）
2到8°C 6个月
样品缓冲液（溶液7）
储存在2到8°C至试剂盒上标注的失效日期。
裂解液，1x（溶液8）
-15至-25°C或2至8°C 3个月

不与真核的溶酶体β-半乳糖苷酶发生交叉反应。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。