Merck
CN
主页3D细胞培养层粘连蛋白包被方案

层粘连蛋白包被方案

开始前注意事项

  1. 确保细胞是健康的且数量足够。
  2. 层粘连蛋白需要在2-8 °C缓慢解冻。如果产品已在室温下加热并发生凝胶,则无法重新激活使用。
  3. 在解冻后,未使用的产品可分装成工作体积后保存在-20 °C
  4. 表面覆盖浓度可能因培养细胞而异。建议进行实验方案优化以确定细胞的实际包被浓度。推荐浓度请见表1
  5. 不要让包被后的培养板或盖玻片过度干燥,因为这会破坏层粘连蛋白的结构并影响细胞的附着。
  6. 上述实验方案步骤均须在无菌条件下执行。

用于培养器具的层粘连蛋白包被实验方案

  1. 在2-8 °C下解冻层粘连蛋白;避免快速解冻以防止形成凝胶。
  2. 在平衡盐溶液中稀释至所需的浓度。溶液浓度取决于应用。典型的原液浓度是0.01%。
  3. 请尽量减少培养表面包被量。
  4. 在覆盖了整个区域后,吸走多余的溶液。这些溶液可用于包被另一个孔或板。
  5. 在加入细胞和培养基之前至少晾干45分钟。

点击即用型层粘连蛋白包被的96孔联排。

用于神经球状体的层粘连蛋白包被实验方案

  1. 先用100 μg/mL聚L-赖氨酸(P5899)或聚D-赖氨酸(P7280)预先涂覆盖玻片。
  2. 将其在室温下孵育30分钟或更长时间。用无菌水洗涤盖玻片并使其干燥。
  3. 它们可以保存在室温下直到准备使用(最长保存1个月)。
    然后用已经预热的30-50 μL层粘连蛋白(50 μg/mL)涂覆盖玻片。
  4. 可以在37 °C、5% CO2加湿培养箱中孵育过夜,或37 °C下30分钟。
  5. 吸走多余的层粘连蛋白并用PBS漂洗两次。或者,用DME(50 μL)洗涤两次。
  6. 将细胞加到盖玻片或玻片上,并按需进行培养。

或者,也有现成可用于神经干细胞的聚D-赖氨酸和层粘连蛋白即用型溶液。

表1.用于细胞附着的层粘连蛋白

点击获取层粘连蛋白模拟物

探索我们的3D细胞培养工具

为您的细胞培养挑战进行故障排除

点击获取细胞培养中的一致性

常见问题解答 (FAQ)

  1. 哪种ECM蛋白最适合于我的细胞?
    虽然层粘连蛋白和纤连蛋白都是广泛使用的ECM蛋白,但应通过测试实验来确定您细胞所需的类型。干细胞在分化的不同阶段会在表面表达多种不同的整合素。ECM蛋白的选择应取决于您需要研究的分化阶段。

  2. 层粘连蛋白产品的纯度是多少?
    我们不测定层粘连蛋白溶液的纯度。而是会通过SDS PAGE凝胶电泳并使得图案(3个条带)与过去的批次相当而确保一致的质量。

  3. 稀释层粘连蛋白的最佳溶剂是什么?
    表1列举了可用于稀释层粘连蛋白的溶剂。

  4. 层粘连蛋白可重复使用吗?
    我们不推荐重复使用层粘连蛋白,因为会在无菌性、层粘连蛋白的浓度及结构方面发生变化。已稀释但未使用的层粘连蛋白可在2 - 8 °C最多保存1周。在完全密封而不会发生污染或层粘连蛋白干涸的情况下,层粘连蛋白包被的平板可在2 - 8 °C最多保存四周。不要使用已变色或在包被材料表面出现蜘蛛网状结构的产品。

  5. 层粘连蛋白进行包被的最佳浓度是多少?
    表1列举了我们层粘连蛋白进行包被的浓度建议。但建议适当优化,以适应特定细胞浓度。

  6. 研究神经分化的最佳ECM蛋白是什么?
    层粘连蛋白或纤连蛋白与聚-D-赖氨酸或聚-L-赖氨酸一起可以很好地支持体外神经分化。请参考实验方案以获取诱导神经分化的详细步骤。

    如有其他问题,请通过这里联系我们的技术服务。