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开始前注意事项
- 确保细胞是健康的且数量足够。
- 层粘连蛋白需要在2-8 °C缓慢解冻。如果产品已在室温下加热并发生凝胶，则无法重新激活使用。
- 在解冻后，未使用的产品可分装成工作体积后保存在-20 °C
- 表面覆盖浓度可能因培养细胞而异。建议进行实验方案优化以确定细胞的实际包被浓度。推荐浓度请见表1。
- 不要让包被后的培养板或盖玻片过度干燥，因为这会破坏层粘连蛋白的结构并影响细胞的附着。
- 上述实验方案步骤均须在无菌条件下执行。
用于培养器具的层粘连蛋白包被实验方案
- 在2-8 °C下解冻层粘连蛋白；避免快速解冻以防止形成凝胶。
- 在平衡盐溶液中稀释至所需的浓度。溶液浓度取决于应用。典型的原液浓度是0.01%。
- 请尽量减少培养表面包被量。
- 在覆盖了整个区域后，吸走多余的溶液。这些溶液可用于包被另一个孔或板。
- 在加入细胞和培养基之前至少晾干45分钟。
点击即用型层粘连蛋白包被的96孔联排。
用于神经球状体的层粘连蛋白包被实验方案
- 先用100 μg/mL聚L-赖氨酸（P5899）或聚D-赖氨酸（P7280）预先涂覆盖玻片。
- 将其在室温下孵育30分钟或更长时间。用无菌水洗涤盖玻片并使其干燥。
- 它们可以保存在室温下直到准备使用（最长保存1个月）。
然后用已经预热的30-50 μL层粘连蛋白（50 μg/mL）涂覆盖玻片。 - 可以在37 °C、5% CO2加湿培养箱中孵育过夜，或37 °C下30分钟。
- 吸走多余的层粘连蛋白并用PBS漂洗两次。或者，用DME（50 μL）洗涤两次。
- 将细胞加到盖玻片或玻片上，并按需进行培养。
或者，也有现成可用于神经干细胞的聚D-赖氨酸和层粘连蛋白即用型溶液。
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常见问题解答 (FAQ)
- 哪种ECM蛋白最适合于我的细胞？
虽然层粘连蛋白和纤连蛋白都是广泛使用的ECM蛋白，但应通过测试实验来确定您细胞所需的类型。干细胞在分化的不同阶段会在表面表达多种不同的整合素。ECM蛋白的选择应取决于您需要研究的分化阶段。
- 层粘连蛋白产品的纯度是多少？
我们不测定层粘连蛋白溶液的纯度。而是会通过SDS PAGE凝胶电泳并使得图案（3个条带）与过去的批次相当而确保一致的质量。
- 稀释层粘连蛋白的最佳溶剂是什么？
表1列举了可用于稀释层粘连蛋白的溶剂。
- 层粘连蛋白可重复使用吗？
我们不推荐重复使用层粘连蛋白，因为会在无菌性、层粘连蛋白的浓度及结构方面发生变化。已稀释但未使用的层粘连蛋白可在2 - 8 °C最多保存1周。在完全密封而不会发生污染或层粘连蛋白干涸的情况下，层粘连蛋白包被的平板可在2 - 8 °C最多保存四周。不要使用已变色或在包被材料表面出现蜘蛛网状结构的产品。
- 层粘连蛋白进行包被的最佳浓度是多少？
表1列举了我们层粘连蛋白进行包被的浓度建议。但建议适当优化，以适应特定细胞浓度。
- 研究神经分化的最佳ECM蛋白是什么？
层粘连蛋白或纤连蛋白与聚-D-赖氨酸或聚-L-赖氨酸一起可以很好地支持体外神经分化。请参考实验方案以获取诱导神经分化的详细步骤。
如有其他问题，请通过这里联系我们的技术服务。