本程序步骤可用于溶菌酶产物的酶学测定。分光光度速率测定(A450,光程 = 1 cm)基于以下反应:
Lysozyme
溶壁微球菌细胞(完整) ––––––––> 溶壁微球菌细胞(已溶解)
单位定义 — 一个单位的溶菌酶在pH6.24、25℃下,使用溶壁微球菌悬液作为底物,在2.6 mL反应混合物中每分钟产生0.001 ΔA450。
请参阅产品化学品安全技术说明书,获取危害和安全操作方法相关信息。
1.0 M磷酸氢二钾溶液(P8584)
1 M 氢氧化钾(KOH)溶液
1 M HCl溶液
溶壁微球菌,ATCC号4698,冻干细胞(M3770)
使用超纯水(25 °C时≥18 MΩxcm电阻率)制备试剂。
缓冲液(50 mM磷酸钾缓冲液,pH 6.24,25°C)— 制备550 mL:
底物悬液(0.015% [w/v] 溶壁微球菌细胞悬液)— 使用溶壁微球菌,ATCC号4698,冻干细胞(M3770)在缓冲液中制备0.15mg/mL悬液。
底物适用性 –该悬液的A450必须介于0.6-0.7之间,而不是缓冲液空白。如有必要,使用适量的缓冲液或溶壁微球菌细胞调整吸光度。
酶溶液(溶菌酶) — 在使用前,立即在冷的(2-8℃)缓冲液中制备含有200-400单位/mL溶菌酶的溶液。
1.将以下试剂移液到合适的比色皿中并平衡至25 °C,使用适当恒温的分光光度计:
2.然后添加:
式中:
df =稀释因子
0.001 = 单位定义中的吸光度(ΔA450)变化
0.1 = 酶溶液的体积(以毫升计)
2.
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