主页 PCR的应用罗氏PCR试剂和PCR实验方案

罗氏PCR试剂和PCR实验方案

用于常规和热启动PCR的罗氏PCR试剂选择指南
用于高保真、困难模板和长片段PCR扩增的罗氏PCR试剂选择指南
Taq DNA聚合酶和标准PCR实验方案
FastStart™ Taq DNA聚合酶和预混液
FastStart™高保真PCR系统
Expand™高保真PCR系统和Expand™高保真^PLUS PCR系统
Pwo SuperYield DNA聚合酶
用于困难模板PCR的高GC PCR系统
Expand™长片段，dNTPack
PCR优化产品

用于常规和热启动PCR的罗氏PCR试剂选择指南
PCR扩增	常规PCR	热启动	多重/测序
理想的酶选择：	Taq DNA聚合酶	FastStart™ Taq DNA聚合酶	FastStart™高保真PCR系统
体验	一致性	特异性	准确性
扩增子大小	最高3 kb	最高3 kb	最高5 kb
特异性
灵敏度
稳健性
相对于Taq的准确性	1x	1x	4x
防残留	是	是	是
单位/50 µL	1.25	2	2.5
分子克隆：	TA克隆	TA克隆	TA克隆
酶	Taq DNA 聚合酶（5 U/μL） Taq DNA 聚合酶（1 U/μL）	FastStart™ Taq DNA 聚合酶（5 U/μL）	FastStart™高保真PCR系统
GMP级酶	GMP级Taq DNA聚合酶（5 U/μL）
dNTPack	Taq DNA 聚合酶， dNTPack (5 U/μL) Taq DNA 聚合酶， dNTPack (1 U/μL)	FastStart™ Taq DNA 聚合酶， dNTPack (5 U/μL)	FastStart™ 高保真PCR系统，dNTPack
预混试剂	PCR预混液	FastStart™ PCR预混液

* 需要防止残留污染和6x更高的保真性？选择Expand™高保真PLUS PCR系统。** 对于20-35 kb的扩增子，选择Expand™ 20 kbPLUS PCR系统。
用于高保真、困难模板和长片段PCR扩增的罗氏PCR试剂选择指南
PCR扩增	宽变量/易获取	高保真	困难模板	长片段
理想的酶选择：	Expand™高保真 PCR系统	Pwo SuperYield DNA聚合酶	高GC含量PCR体系	Expand™长片段
体验	稳健性	保真性	可靠性	多功能性
扩增子大小	最高5 kb	最高3 kb	最高5 kb	5至25 kb**
特异性
灵敏度
稳健性
相对于Taq的准确性	3x	18x	3x	3x
防残留	无*	无	无	无
单位/50 µL	2.6	2.5	2	3.5
分子克隆：	TA克隆	平末端克隆	TA克隆优于平末端克隆	TA克隆
酶	Expand™ 高保真 PCR系统 Expand™高保真^PLUS PCR 系统	Pwo SuperYield DNA 聚合酶	高GC含量PCR体系
dNTPack	Expand™高保真 PCR系统， dNTPack Expand™高保真^PLUS PCR 系统，dNTPack	Pwo SuperYield DNA 聚合酶， dNTPack	高GC-RICH PCR 系统， dNTPack	Expand™ 长片段， dNTPack
预混试剂	高保真PCR 预混液	Pwo预混液

前沿科学不应出于经济原因而妥协。自从引入PCR技术以来，罗氏为PCR试剂提供了金标准。我们先进的分离、纯化和制造技术不仅能确保您获得清晰、可靠的结果，还能确保便捷性和可满足任何实验室预算要求的可负担性。

可靠性 – 在各个批次、各个管以及各个实验室获得可靠的结果。
高性能 – 将便捷的dNTPack中的优质酶和PCR级核苷酸相结合，实现更高的灵敏度和产量。
一致性 – 采用仅需添加引物和模板的预混液，充分提升实验的性能

PCR级核苷酸确保理想的性能。

PCR的成功高度依赖于酶和核苷酸的选择。罗氏PCR酶可以便捷的dNTPacks形式提供，其中包含不含添加剂的核苷酸钠盐预混溶液。这些经功能测试的PCR级核苷酸通过酶促合成制造，并结合了独特的纯化工艺，可有效促进提高PCR结果的质量。

纯度 – 选择符合现行化学合成核苷酸制剂典型质量程序要求的无修饰碱基、四磷酸盐或焦磷酸盐污染物的核苷酸，来提高您PCR的灵敏度。
稳定性 – 采用在理想pH下提供的dNTP来延长保质期并提高反应稳定性，从而充分提高产量。

Taq DNA聚合酶和标准PCR实验方案

可在超低模板要求的情况下实现稳健扩增的可负担PCR。

罗氏Taq DNA聚合酶是在GMP条件下生产的。这种高度纯化的酶通过了多个严格的功能性和纯度测试，可确保每批产品都能实现可靠、一致的结果。如需更多信息，请查看我们的标准PCR实验方案。

通过高度的批次间一致性获得可靠、可重复的结果
无需每一新批次都进行测试 - 我们会替您完成
将dUTP插入与尿嘧啶-DNA糖苷酶结合以防止PCR交叉污染

图 1.批次间的一致性可确保可重复性的结果。对五个不同批次Taq DNA聚合酶扩增0.5 kb lambda DNA片段的能力进行了测试。采用每批次均进行测试的罗氏Taq DNA聚合酶获得可靠、一致的结果。

GMP级Taq DNA聚合酶属于高性能、经验证扩增酶家族，采用经过评估的生产、质量控制和灌装程序进行生产。

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
最高3 kb				1x	是	1.25	TA克隆

产品	货号	规格
Taq DNA聚合酶 \| 酶 + 缓冲液
5 U/μL	11 146 173 001	500 U用于最高1,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	11 418 432 001	1,000 U（4 x 250 U）用于最高2,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	11 596 594 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高5,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	11 435 094 001	5,000 U（20 x 250 U）用于最高10,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
1 U/μL	11 647 687 001	1,000 U（4 x 250 U）用于最高2,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
5 U/μL	04 728 866 001	100 U用于最高200次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	04 728 874 001	500 U（2 x 250 U）用于最高1,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	04 728 882 001	1,000 U（4 x 250 U）用于最高2,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	04 728 904 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高5,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
	04 728 858 001	5,000 U（20 x 250 U）用于最高10,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
1 U/μL	04 738 225 001	250 U用于最高500次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
1 U/μL	04 738 241 001	1,000 U（4 x 250 U）用于最高2,000次20 μL终体积反应，每次反应包含0.5 U Taq DNA聚合酶
PCR预混液 \| 即用型配方；酶，缓冲液，dNTP
	11 636 103 001	1个试剂盒用于最高200次50 μL终体积PCR反应，每次反应包含2.5 U Taq DNA聚合酶

FastStart™ Taq DNA聚合酶和预混液

选择研究人员信任的聚合酶，如qPCR和LightCycler^®系统。

FastStart™ Taq DNA聚合酶是一种热稳定的化学修饰形式的重组Taq DNA聚合酶。FastStart™ Taq DNA聚合酶因修饰而仅在高温下会被激活，使其成为您检测体系扩增延迟时的理想酶选择。

获得更高的特异性、灵敏度和产量。热启动PCR可提高PCR的性能，让构建PCR更为简单。
使用便捷的自动化构建。完整的反应混合液可在室温下稳定24小时。
防止PCR残留污染。将dUTP插入与尿嘧啶-DNA糖苷酶结合以防止PCR交叉污染。

图 4.室温下反应构建完成后，立即（E0）以及24小时后（E24）对3-300 ng cDNA进行人促红细胞生成素基因扩增。

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
最高3 kb				1x	是	2 µL	TA克隆

产品	货号	规格
FastStart™ Taq DNA聚合酶 \| 酶 + 缓冲液
5 U/μL	12 032 929 001	500 U（2 x 250 U）用于最高250次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	12 032 937 001	1,000 U（4 x 250 U）用于最高500次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	12 032 945 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高1,250次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	12 032 953 001	5,000 U（20 x 250 U）用于最高2,500次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
FastStart™ Taq DNA聚合酶，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
5 U/μL	04 738 314 001	100 U用于最高50次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	04 738 357 001	500 U（2 x 250 U）用于最高250次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	04 738 381 001	1,000 U（4 x 250 U）用于最高500次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	04 738 403 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高1,250次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
	04 738 420 001	5,000 U（20 x 250 U）用于最高2,500次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U FastStart Taq DNA聚合酶
FastStart™ PCR预混液 \| 即用型配方；酶，缓冲液，dNTPs
	04 710 436 001	2 x 1.25 mL用于最高250次20 μL终体积反应
	04 710 444 001	8 x 1.25 mL用于最高1,000次20 μL终体积反应
	04 710 452 001	10 x 5 mL用于最高5,000次20 μL终体积反应

FastStart™高保真PCR系统

多重和测序严格的热启动和更高的保真性是复杂终点法PCR应用（如多重或测序）的关键。按照多重和测序要求，选择FastStart™高保真PCR系统用于最高5 kb的复杂高保真热启动PCR。相对于标准Taq DNA聚合酶和FastStart™ Taq DNA聚合酶，它最高有6倍的准确度。

以快速、高质量结果获得出色的多重性能
体验高于Taq和FastStart™ Taq DNA聚合酶六倍的保真性
当扩增困难模板时使用提供的PCR添加剂（DMSO）

图 5.18重（74 bp - 470 bp）PCR中的灵敏度测试。针对不同浓度的人基因组DNA采用一组18重的引物对。

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
最高5 kb				6x	是	2.5	TA克隆

产品	货号	规格
FastStart™高保真PCR系统 \| 酶 + 缓冲液
	03 553 400 001	500 U（2 x 250 U）用于最高200次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U FastStart Taq DNA聚合酶
	03 553 361 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高1,000次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U FastStart Taq DNA聚合酶
FastStart™高保真PCR系统，dNTPack \| 即用型配方；酶，缓冲液，dNTPs
	04 738 284 001	125 U用于最高50次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U FastStart Taq DNA聚合酶
	04 738 292 001	500 U（2 x 250 U）用于最高200次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U FastStart

Expand™高保真PCR系统和Expand™高保真PLUS PCR系统

Expand™高保真PCR试剂旨在对各种不同的检测系统和扩增子类型实现稳健的扩增，它由Taq DNA聚合酶和一种带有校正活性的聚合酶组成的酶混合物组成。选择Expand™高保真^PLUS PCR系统用于最高5kb的稳健PCR，并防止残留污染。

使用一种酶用于所有的应用。Expand™高保真PCR系统可稳健扩增一系列不同的模板，并确保高产量、保真性和灵活性。
检测以前无法检测到的扩增产物，并避免假阴性。
从少量模板DNA中获得成功的PCR结果。

Expand™高保真^PLUS PCR系统是稳健高保真应用的理想选择，包括克隆和用具有放射性或非放射性修饰的核苷酸对DNA片段进行标记。此外，还可将dUTP插入与尿嘧啶-DNA糖苷酶结合以防止PCR交叉污染。

图 6.将Expand™高保真PLUS PCR系统与四种市售的聚合酶预混液进行比较。根据各自制造商推荐的条件，采用不同量（ng）的人基因组DNA来扩增4.8 kb的组织纤溶酶原激活因子（tPA）基因片段。即便是针对最低1 ng的人基因组DNA，Expand高保真PLUS PCR系统也表现出了最佳的特异性、灵敏度和产量结果。

供应商A：Taq DNA聚合酶（N端删除）、一种校正聚合酶和一种热启动抗体的混合物。
供应商B和D：Taq DNA聚合酶和一种校正聚合酶的混合物。
供应商C：Taq DNA聚合酶、一种校正聚合酶和一种增强因子的混合物

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
最高5 kb				3x	无*	2.6	TA克隆

产品	货号	规格
Expand™高保真PCR系统 \| 酶 + 缓冲液
	11 732 641 001	100 U用于最高40次50 μL终体积反应，每次反应包含2.6 U酶混合物
	11 732 650 001	500 U（2 x 250 U）用于最高200次50 μL终体积反应，每次反应包含2.6 U酶混合物
	11 759 078 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高1,000次50 μL终体积反应，每次反应包含2.6 U酶混合物
Expand™高保真PCR，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
	04 738 250 001	100 U用于最高40次50 μL终体积反应，每次反应包含2.6 U酶混合物
	04 738 268 001	500 U（2 x 250 U）用于最高200次50 μL终体积反应，每次反应包含2.6 U酶混合物
	04 738 276 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高1,000次50 μL终体积反应，每次反应包含2.6 U酶混合物
高保真PCR预混液 \| 即用型配方；酶，缓冲液，dNTPs
	12 140 314 001	1个试剂盒用于最高500次20 μL终体积反应

产品	货号	规格
Expand™高保真^PLUS PCR系统 \| 酶 + 缓冲液
	03 300 226 001	500 U（2 x 250 U）用于最高500次20 μL终体积反应，每次反应包含1 U酶混合物
	03 300 234 001	2,500 U（10 x 250 U）用于最高2,500次20 μL终体积反应，每次反应包含1 U酶混合物
Expand™高保真^PLUS PCR系统，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
	04 743 725 001	125 U用于最高125次20 μL终体积反应，每次反应包含1 U酶混合物
	04 743 733 001	500 U（2 x 250 U）用于最高500次20 μL终体积反应，每次反应包含1 U酶混合物

Pwo SuperYield DNA聚合酶

对于序列准确性至关重要且不能牺牲产量的应用而言，高保真PCR是不可或缺的。使用Pwo SuperYield DNA聚合酶可获得具有稳定高保真性的高产量PCR产物。当与校正逆转录酶（如Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒）结合时，选择最高的保真性并避免序列错误、碱基交换和移码突变。该组合是克隆、定点突变和基因表达分析等应用的理想选择。

获得出色的保真性和高产量。无需优化即可获得高于Taq DNA聚合酶18倍的高保真性。
针对困难模板获得高性能。高GC溶液可实现高GC DNA的扩增。
减少克隆过程的实验步骤。 直接在Pwo SuperYield PCR预混液中进行酶消化。

图 7.更高的RT-PCR准确性校正逆转录酶（Transcriptor高保真逆转录酶，罗氏）和一种用于扩增的校正聚合酶（Pwo SuperYield DNA聚合酶，罗氏）的比较。将数据与一种常用的M-MuLV逆转录酶和Taq DNA聚合酶进行比较。在逆转录和25个PCR循环后使用454测序系统对错误率进行测定。罗氏酶的错误率是四组独立实验的平均值，其中至少测序了3.1 × 106个碱基。对于M-MuLV逆转录酶和Taq DNA聚合酶，测序了4.5 × 106个碱基。准确度以“错误率-1”进行代表。

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
最高3 kb				18x	否	2.5	平末端克隆

产品	货号	规格
Pwo Super Yield DNA聚合酶 \| 酶 + 缓冲液
	04 340 850 001	500 U（2 x 250 U）用于最高200次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U Pwo SuperYield DNA聚合酶
Pwo Super Yield DNA聚合酶，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
	04 743 750 001	100 U用于最高40次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U Pwo SuperYield DNA聚合酶
Pwo预混液 \| 即用型配方；酶，缓冲液，dNTPs
	03 789 403 001	2.5 ml (10 × 250 μL) 用于最高100次50 μL终体积反应，每次反应包含2.5 U Pwo SuperYield DNA聚合酶

用于困难模板PCR的高GC PCR系统

选择高GC PCR系统（一种校正聚合酶和Taq DNA聚合酶的混合物），可增强对用其他聚合酶或聚合酶与添加剂混合物难以或无法扩增的模板的扩增效果。该混合物增强的持续扩增能力结合独特的高GC分辨溶液，可实现出色的性能。

扩增困难模板，包括高GC靶标和重复序列。
使用所提供的PCR级水和优化的试剂，包括高GC分辨溶液
扩增最长5 kb的DNA片段

图 8.采用高GC PCR系统成功扩增高GC模板。使用高GC PCR系统或Expand高保真PCR系统对人ApoE基因中一段264 bp的模板（74% GC含量）进行扩增。

结果: 高GC PCR系统通过使用高GC分辨溶液扩增高GC片段，并实现高特异性和产量。

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
最高5 kb				3x	否	2	TA克隆优于平末端克隆

产品	货号	规格
高GC PCR系统 \| 酶 + 缓冲液
	12 140 306 001	100 U用于最高50次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U酶混合物
高GC PCR系统，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
	04 743 784 001	100 U用于最高50次50 μL终体积反应，每次反应包含2 U酶混合物

Expand™长片段，dNTPack

该新一代系统来自首创长模板PCR的罗氏公司。选择Expand™长片段dNTPack用于对基因组DNA进行5至25 kb PCR产物的稳定扩增。当扩增片段长于20 kb时，使用Expand™ 20 kb^PLUS PCR系统。该独特系统的特点在于具有优化的缓冲液和混合酶混合物。

凭借高特异性、产量和更高的保真性，稳定扩增最长25 kb的长模板。
使用便捷和灵活的试剂盒来节省时间和资源。针对所有片段大小使用一种缓冲液，并使用所提供的DMSO和MgCl₂溶液对反应进行微调。
适用于所有的长模板应用，并可实现仅含有所需片段的高产量。
订购包含有PCR级核苷酸预混溶液的高性价比dNTPack。

图 9.使用Expand™长片段 dNTPack扩增不同的基因组模板

扩增子大小	特异性	灵敏度	稳健性	相对于Taq的准确性	防残留	单位 /50 µL	分子克隆：
5至25 kb				3x	否	3.5	TA克隆

产品	货号	规格
Expand™长片段，dNTPack \| 酶 + 缓冲液 + dNTP套装
	04 829 034 001	175 U用于最高125次20 μL终体积反应，每次反应包含1.4 U酶混合物
	04 829 042 001	700 U用于最高500次20 μL终体积反应，每次反应包含1.4 U酶混合物
	04 829 069 001	3,500 U（5 x 700 U）用于最高2,500次20 μL终体积反应，每次反应包含1.4 U酶混合物

* 对于20-35 kb的扩增子：选择Expand 20 kbPLUS PCR系统。
产品	货号	规格
Expand™ 20 kb^PLUS PCR系统 \| 酶 + 缓冲液
	11 811 002 001	200 U用于最高40次50 μL终体积反应，每次反应包含5 U酶混合物

PCR优化产品
产品	货号	规格
PCR优化试剂盒	11 636 138 001	1个试剂盒最多分别用于100次或50次的100 μL终反应体积的一步法或两步法优化检测体系
尿嘧啶-DNA 糖基化酶	11 444 646 001	100 U
尿嘧啶-DNA糖基化酶，不耐热	11 775 367 001	100 U
尿嘧啶-DNA糖基化酶，不耐热	11 775 375 001	500 U
T4 基因 32 蛋白	10 972 983 001	100 µg
T4 基因 32 蛋白	10 972 991 001	500 µg
PCR 缓冲液	11 699 121 001	2 x 2 mL (2 × 1 mL的每种溶液 )
PCR 缓冲液不含 MgCl₂，10x 浓缩	11 699 105 001	3 × 1 mL
MgCl₂贮备液	11 699 113 001	3 × 1 mL
水，PCR 级	03 315 843 001	100 mL（4瓶25 mL）
	03 315 932 001	25 mL（25瓶1 mL）
	03 315 959 001	25 mL（1瓶25 mL）
剥离 PCR 管和盖	11 667 009 001	125条（8管/条）

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