MILLIPLEX^®小鼠高灵敏度T细胞多重检测试剂盒的生物学评价

• 炎症与细胞因子的研究意义
• 评价小鼠高灵敏度T细胞多重检测试剂盒
• 评价结果
• 使用MILLIPLEX^®小鼠试剂盒进行强大的细胞因子谱分析
• 材料

许多疾病都与炎症有关，因而细胞因子的表达分析在疾病研究中占有重要地位。本文阐释了MILLIPLEX^® Mouse High Sensitivity T Cell Multiplex Panel（小鼠高灵敏度T细胞多重检测试剂盒）的应用评价，包括生物学相关背景下的细胞因子低水平表达研究，以及细胞因子分泌的多指标并行的定量分析。

炎症与细胞因子的研究意义

多种临床和亚临床疾病状态都涉及低水平的炎症反应，比如自身免疫性疾病、代谢疾病和癌症。因此，细胞因子低水平表达研究的意义重大，有助于更加深入地了解免疫系统及其对大多数抗原多方面的应答反应，特别是免疫细胞介导的炎症反应。细胞因子的皮克级检测对于了解其致病性尤为重要。对于模式生物，比如小鼠，面临样本可用性和细胞因子低水平检测方面的独特挑战。

评价小鼠高灵敏度T细胞多重检测试剂盒

我们专门开发了一种小鼠高灵敏度T细胞多重检测Panel（液相芯片试剂盒），运用Luminex^® xMAP^®液相悬浮芯片技术，可同时分析多达18种小鼠细胞因子。只需25µL样品就能对小鼠进行18种细胞因子水平分析，既能体外使用PMA、PHA、脂多糖(LPS)、Con-A或钙离子载体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)培养基样本，也能体内使用LPS刺激的小鼠、肥胖小鼠模型和衰老小鼠模型的血清样本。

一般来说，小鼠PBMC对体外刺激剂的应答反应难于研究，因为分泌的细胞因子水平过于低下。MILLIPLEX^®小鼠高灵敏度T细胞检测试剂盒可有效检测不同的刺激剂引起的细胞因子变化。对于LPS刺激小鼠（炎症早期）、肥胖型小鼠（OB/OB和DB/DB）和衰老小鼠模型（幼年小鼠PK老年小鼠的细胞因子谱），该试剂盒还能对其体内低水平的血清细胞因子进行检测。

免疫检测方案

采用96孔板进行多重检测。详细步骤如下：

• 用150 µL洗涤缓冲液润湿微孔板10分钟并干燥。
• 加入50 µL标准品，或25 µL样品和25 µL检测缓冲液。
• 在所有微孔中加入25 µL微球，4°C下孵育过夜。
• 微球洗涤三次，然后加入50 µL生物素化检测抗体混合液，室温孵育1小时。
• 加入50 µL链霉亲和素-藻红蛋白，再次室温孵育30分钟。
• 微球洗涤三次，加入150 µL鞘液，在Luminex^®仪器上读数（此例中为Luminex^® 200™系统）。

评价结果

标准曲线

MILLIPLEX^®小鼠高灵敏度T细胞试剂盒的标准曲线特性见表1和图1。

表1.MILLIPLEX^®小鼠高灵敏度T细胞试剂盒对18种分析物的所有标准曲线范围、灵敏度、精密度、准确度和线性。

小鼠PBMC分析物检测

这款高灵敏度试剂盒可对小鼠PBMC培养基中的低水平分析物进行检测，如表2所示。

表2.MILLIPLEX^®小鼠高灵敏度T细胞试剂盒可检测小鼠PBMC培养基中的低水平分析物。PBMC(Bioreclamation)解冻、洗涤，并用含10% FCS和1%青霉素/链霉素的RPMI培养基(Gibco)重悬至10⁶细胞/mL。PBMC按10⁶细胞/孔分装，37°C过夜孵育。次日，分别加入PMA、A23187、LPS、Con A、PHA或以上所有刺激剂，最终浓度分别为0.025、0.01、1、5或20 µg/mL。在不同时间点采集该刺激后培养基，15,000 RPM离心10 min，所得无细胞上清在多重检测前-80°C冻存。

糖尿病小鼠模型

多重检测试剂盒对糖尿病小鼠模型的检测数据如图3所示。

衰老小鼠模型

多重试剂盒对衰老小鼠模型的检测数据见图4。

仅供研究使用，不可用于诊断。