用于细胞培养的层粘连蛋白包被实验方案

层粘连蛋白是一种细胞外基质多结构域三聚体糖蛋白，并且是支持粘附、增殖和分化的基底膜的主要非胶原组分。层粘连蛋白是由通过多个二硫键连接的A、B1和B2链组成。层粘连蛋白支持多种细胞类型的生长和分化，包括表皮、内皮、神经、肌肉和肝脏细胞。用于细胞培养的最佳浓度取决于细胞类型和特定的应用。

层粘连蛋白包被表面的重要注意事项

• 确保细胞是健康的且数量足够。
• 层粘连蛋白必须在2 - 8 °C缓慢解冻。如果产品达到了室温并发生了凝胶，则不能被再活化进行使用。
• 在解冻后，未使用的产品可分装成工作体积后保存在-20 °C
• 表面覆盖浓度可能因培养细胞而异。建议进行实验方案优化以确定细胞的最佳包被浓度。推荐浓度请见表1。
• 不要让包被后的培养板或盖玻片过度干燥，否则会破坏层粘连蛋白的结构并影响细胞的附着。
• 实验方案中的所有步骤均须在无菌条件下执行。

用于细胞培养的层粘连蛋白包被实验方案

1. 在2 - 8 °C解冻层粘连蛋白；避免快速解冻以防止凝胶形成。
2. 在平衡盐溶液中稀释至所需的浓度。溶液浓度取决于应用。典型的原液浓度是0.01%。
3. 请尽量减少培养表面包被量。
4. 在覆盖了整个区域后，吸走多余的溶液。这些溶液可用于包被另一个孔或板。
5. 在加入细胞和培养基之前至少晾干45分钟。

用于神经球状体的层粘连蛋白包被实验方案

1. 先用100 μg/mL聚L-赖氨酸（货号P5899）或聚D-赖氨酸（货号P7280）预先涂覆盖玻片。
2. 将其在室温下孵育30分钟或更长时间。用无菌水洗涤盖玻片并使其干燥。
3. 它们可以保存在室温下直到准备使用（最长保存1个月）。
   然后用已经预热的30-50 μL层粘连蛋白（50 μg/mL）涂覆盖玻片。
4. 可以在37 °C、5% CO₂加湿培养箱中孵育过夜，或37 °C下30分钟。
5. 吸走多余的层粘连蛋白并用PBS漂洗两次。或者，用DME（50 μL）洗涤两次。
6. 将细胞加到盖玻片或玻片上，并按需进行培养。

或者，也有现成可用于神经干细胞的聚D-赖氨酸和层粘连蛋白即用型溶液。

层粘连蛋白包被表面的常见问题

• 哪种ECM蛋白最适合于我的细胞？
  层粘连蛋白和纤连蛋白是广泛使用的细胞外基质（ECM）蛋白；然而，为了获得最佳结果，需通过实验确定每个细胞系最适合的ECM。干细胞在分化的不同阶段会在表面表达多种不同的整合素。ECM蛋白的选择应取决于您正在研究的分化阶段。
  
  
• 层粘连蛋白产品的纯度是多少？
  我们不测定层粘连蛋白溶液的纯度。而是会通过SDS PAGE凝胶电泳并使得图案（3个条带）与过去的批次相当而确保一致的质量。
  
  
• 稀释层粘连蛋白的最佳溶剂是什么？
  表1列举了可用于稀释层粘连蛋白的溶剂。
  
  
• 层粘连蛋白可重复使用吗？
  我们不推荐重复使用层粘连蛋白，因为会在无菌性、层粘连蛋白的浓度及结构方面发生变化。已稀释但未使用的层粘连蛋白可在2 - 8 °C最多保存1周。在完全密封以防止发生污染或干涸的情况下，层粘连蛋白包被的平板可在2 - 8 °C最多保存四周。不要使用已变色或在包被材料表面出现网状结构的产品。
  
  
• 层粘连蛋白进行包被的最佳浓度是多少？
  表1列举了我们层粘连蛋白进行包被的浓度建议。为了获得最佳结果，需针对您特定的细胞进行浓度优化。
  
  
• 研究神经分化的最佳ECM蛋白是什么？
  层粘连蛋白或纤连蛋白与聚-D-赖氨酸或聚-L-赖氨酸一起可以很好地支持体外神经分化。请参考实验方案以获取诱导神经分化的详细步骤。