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Merck
CN

17-677

Sigma-Aldrich

ChIPAb+ 二甲基组蛋白H3（Lys4）- ChIP经验证的抗体和引物组

clone CMA303, from mouse

别名:

H3K4me2, Histone H3 (di methyl K4)

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关于此项目

UNSPSC代码:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.52

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生物来源

mouse

质量水平

100

抗体形式

purified immunoglobulin

克隆

CMA303, monoclonal

种属反应性

human, vertebrates

制造商/商品名称

ChIPAb+
Upstate®

技术

ChIP: suitable (ChIP-seq)
dot blot: suitable
multiplexing: suitable
western blot: suitable

同位素/亚型

IgG2bκ

NCBI登记号

NM_003493

UniProt登记号

Q66I33

运输

dry ice

相关类别

一般描述

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物（通过qPCR对每个批次进行检测），以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列，使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体，以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+二甲基组蛋白H3（Lys4）组包括抗二甲基组蛋白H3（Lys4）抗体，阴性对照抗体（纯化的小鼠IgG）和qPCR引物，可扩增人GAPDH基因编码区内的213 bp区域。二甲基组蛋白H3（Lys4）和阴性对照抗体以可扩展的“每个ChIP”反应大小提供，可用于功能上验证二甲基组蛋白H3（Lys4）相关染色质的沉淀。
约17 kDa的二甲基-组蛋白H3

免疫原

表位：氨基酸1-12
针对对应于组蛋白H3的氨基酸1-12的合成肽（Lys4二甲基化）制备二甲基组蛋白H3（Lys4）纯化抗体。

应用

染色质免疫沉淀：
使用2 µg正常小鼠IgG或抗二甲基组蛋白H3（Lys4）抗体和Magna ChIP G试剂盒（目录号17-611），对从HeLa细胞制备的超声染色质（每IP 2 X 106细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用β-珠蛋白ChIP引物与GAPDH编码引物通过qPCR验证了二甲基组蛋白H3（Lys4）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。 数据表示为每个IP样品相对于带有指定引物的每种抗体的输入染色质的输入百分比。
请参阅EZ-Magna G ChIP（目录号17-408）或EZ-ChIP（目录号17-371）协议以获取实验详细信息。

ChIP-seq分析：
使用Magna ChIP HiSens试剂盒（目录号17-10460），2 µg抗二甲基组蛋白H3（Lys4）抗体（目录号17-677），20 µL蛋白A/G珠和1e6交联HeLa细胞染色质进行染色质免疫沉淀，然后使用磁珠纯化DNA。使用标准规程从Input和ChIP DNA样品制备文库，带Illumina条形码适配器，并在Illumina HiSeq仪器上进行分析。在去除TagDust（http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource）标签后，使用Bowtie（http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml）映射了FastQ文件中的超过1600万次读取。使用MACS（http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/）识别峰，并从BigWig和BED文件在UCSC Genome Browser（http://genome.ucsc.edu）中以自定义轨道的形式显示峰和读数。在04-790和17-677数据集中识别出的最高25％峰与HeLa S3的ENCODE H3K4me2 BROAD组蛋白轨迹中识别出的峰有92和90%重叠。

蛋白质印迹分析：
重组组蛋白H3（泳道1）和HeLa酸提取物（泳道2）通过电泳分离，转移到PVDF膜上，并用抗二甲基组蛋白H3（Lys4）（2 μg/mL）进行探测。
使用与HRP偶联的山羊抗小鼠二抗（目录号AP124P）和化学发光检测系统对蛋白质进行可视化。

斑点印迹分析：
用抗二甲基H3（Lys4）（浓度为2.0 ug/mL，稀释度为1:500）探测含有具有各种修饰的组蛋白肽的AbSurance组蛋白H3抗体特异性阵列（目录号16-667）和AbSurance组蛋白H2A，H2B，H4抗体特异性阵列（目录号16-665）。 使用与HRP偶联的驴抗小鼠IgG和化学发光检测系统观察蛋白质。

Beadlyte组蛋白肽特异性测定：
将0.15 μg/ml纯化的抗二甲基组蛋白H3（Lys4），
克隆CMA303与微球混合物一起孵育与组蛋白H3肽
偶联，并进行以下修饰：
1. 未修饰的H3（K4）
2. 单甲基H3（K4）
3. 二甲基H3（K4）
4. 三甲基H3（K4）
5.三甲基H3（K27）
然后通过过滤除去未结合的抗体。
将肽抗体复合物与a
PE偶联的抗小鼠二抗一起孵育。
在Luminex 100
仪器上读取荧光。绘制了中值荧光强度（MFI）。
研究子类别
染色质生物学
研究类别
表观遗传学&核功能
该ChIPAb+二甲基组蛋白H3（Lys4）-ChIP验证的抗体&引物组方便地包括抗体 & 特异性对照PCR引物。

生化/生理作用

识别赖氨酸4二甲基化的组蛋白H3，Mr 17 kDa。
该肽序列在广泛的动植物物种中是相同的，因此预期有广泛的交叉反应性。。

包装

25次测定/试剂盒，约2 μg/染色质免疫沉淀

外形

形式：纯化
抗二甲基组蛋白H3（Lys4）（小鼠单克隆IgG1，克隆CMA303）。一个小瓶，包含50 μg蛋白G纯化抗体，溶于50 μL PBS（含0.05%叠氮化钠）中。储存于-20°C。

正常小鼠IgG。两个小瓶，包含25 μg纯化小鼠IgG，溶于25 μL储存缓冲液（含0.1%叠氮化钠）中。储存于-20°C。

ChIP引物GAPDH编码。一个小瓶，其中包含75 μL的5 μM每种对人GAPDH编码区具有特异性的引物。储存于-20°C。
对于：GGC TCC CAC CTT TCT CAT CC
REV: GGC CAT CCA CAG TCT TCT GG

制备说明

自收到之日起，在-20°C条件下可稳定保存1年。
分装直至初始解冻，以避免冻融循环。

分析说明

对照
包括阴性对照小鼠IgG抗体和对人β-珠蛋白特异性的对照引物。
染色质免疫沉淀：
使用2 µg正常小鼠IgG或抗二甲基组蛋白H3（Lys4）抗体和Magna ChIP G试剂盒（目录号17-611），对从HeLa细胞制备的超声染色质（每IP 1 X 106细胞当量）进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物GAPDH编码通过qPCR验证了二甲基组蛋白H3（Lys4）相关DNA片段的成功免疫沉淀（请参见图）。
有关实验详细信息，请参阅EZ-Magna G ChIP（目录号17-409）或EZ-ChIP（目录号17-371）方案。

法律信息

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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10 - Combustible liquids

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