Mae III

Mae III 是一种限制性酶，可识别 ↓GTNAC 序列并生成具有 5′-内聚末端的片段。

识别位点：GTNAC
GTNAC
限制性位点：↓GTNAC
↓GTNAC
热灭活：没有有关 Mae III 是否可以热灭活的信息。

Mae III 已被用作 PCR 产物的限制酶。

缺乏非特异性内切核酸酶活性
将 1μg λDNA 与过量的 Mae III 一起在 50 μl 孵育缓冲液中孵育 16 小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。

缺乏核酸外切酶活性
将大约 5 μg [3H] 标记的小牛胸腺 DNA 与 3μl Mae III 一起溶于总体积为 100 μl 的 50mM Tris-HCl 溶液（含 10mM MgCl₂、1mM 二硫赤藓糖醇，pH 约 7.5）中，并在 +37℃ 下孵育 4 小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。

不同DNA上的切割位点数

• λ: 156
• φX174: 17
• Ad2: 118
• M13mp7: 25
• pBR322: 17
• pBR328: 18
• pUC18: 11
• SV40: 14

在总体积为 25 μl (1x)的特殊的 Mae I 孵育缓冲液中，一个单位为在 +55 °C、1 小时内完全切割 μg λDNA 所需的酶活性。

相容末端
Mae III 末端与 Bst E II 生成的末端相容。

同裂酶
该酶没有已知的同分异构体。

甲基化敏感性
没有证据表明该酶被甲基化抑制。

SuRE/Cut 缓冲体系
建议使用粗体的缓冲液以获得最佳活性

• A：0-10%
• B：10-25%
• H：10-25%
• L：0-10%
• M：0-10%

注意：请使用酶随附的特殊 2x 孵育缓冲液代替 SuRE/Cut 缓冲液体系。

孵育温度
+55°C

单位定义
一个单位是在 +55°C 下于 1 小时内在 25μl 特殊孵育缓冲液中完全裂解 1μg λDNA 所需的酶活性。

热灭活
无资料。

连接和重切割测定
将通过完全消化 1 μg λDNA 获得的 Mae III I 片段与 10 μl 的 1U T4 DNA连接酶连接，连接方法是在66 mM Tris-HCl溶液（含 5mM MgCl₂、5mM 二硫苏糖醇、1mM ATP，在 +8°C 下 pH 7.5）中在+ 4℃下孵育16小时，得到1 μg λDNA 片段回收率高于 95%。
随后用 Mae III 重新酶切，得到高于 95% 的典型 λDNA × Mae III 片段。

在 PCR 缓冲液中的活性：0%

在 PCR 混合液（Taq DNA 聚合酶缓冲液）中的相对活性为 0%。PCR 混合液含有 λDNA、引物、10mM Tris-HCl（pH 8.3，20℃）、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA 聚合酶。该混合液可用于 25 个扩增循环。在 Pwo SuperYield DNA 聚合酶 PCR 混合液的反应缓冲液中的活性为 25％。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。