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病毒载体下游处理

病毒载体纯化工艺历来以单克隆抗体系统为基础,其设计无法达到必要的回收水平。

专为基因治疗病毒载体下游处理而设计的新技术的引入为提高产量和吞吐量提供了机会。可用于优化病毒载体下游处理的方法包括:

  • 超滤/渗滤操作,特别是将切向流过滤 (TFF) 用于细胞或病毒收获和纯化、下游蛋白质浓缩和渗滤以及最终制剂
  • 强化超滤/渗滤
  • 操作,特别是将切向流过滤 (TFF) 用于细胞或病毒收获和纯化、下游蛋白质浓缩和渗滤以及最终制剂
  • 加强色谱工艺,通过高生产率、一次性使用的色谱膜吸附器等技术,减少了单元操作的数量和规模

这些下游技术有可能将病毒载体纯化时间从数小时缩短到数分钟,同时提高回收率。此外,它们还能促进规模扩大,减少工艺足迹,提高设备利用效率。



初步净化

对含有病毒载体的粗培养基进行深度过滤或离心和深度过滤相结合的方法,以去除大的细胞碎片和其他污染物。

二次澄清

通过其他步骤进一步纯化一次澄清的澄清培养基。

超滤/重滤

超滤和重滤分别用于浓缩和缓冲液交换。病毒载体通过尺寸过滤与杂质分离。

层析

至少有两种层析方法用于纯化病毒载体,包括离子交换、亲和及尺寸排阻。

病毒过滤

纯化后的病毒载体要经过 15 纳米孔径的纳滤,以去除偶然出现的病毒、内毒素和任何其他残留杂质和聚集物。

无菌过滤

无菌过滤或减少生物负荷可在工艺中多次使用。进料流通过 0.4 或 0.2 微米灭菌级过滤器,以去除加工过程中引入的细菌和其他微生物。

最终灌装

将纯化和无菌的病毒载体灌装到最终预定的容器中。这里需要仔细考虑配方、包装材料和储存条件,以确保稳定性和完整性。

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