图 1.免疫组织化学染色
在下表的材料表中可找到许多此类产品。
脱蜡并水化 | 抗原修复 | 内源性过氧化物酶失活
注意:该步骤仅在无染色或染色很弱时才进行,或根据一抗说明书要求抗原进行修复时才进行。
根据抗体及抗原,有多种可行办法用于抗原的修复:
酶修复:
微波修复:
注意:仅在使用过氧化物酶偶联二抗或ExtrAvidin-过氧化物酶时进行该步骤。
注意:
a. 在进行一抗反应前用5% BSA对样本预孵育10分钟可降低背景染色。针对动物组织,可采用同二抗相同来源物种的5-10%正常血清获取最佳效果。
b. 在使用前根据不同的一抗选择最合适的稀释浓度和孵育时间。
选择1- 生物素/ExtrAvidin检测
选择2- 酶标二抗
建议在最终洗涤步骤时进行底物混合物的制备。
注意:加入1mM左咪唑(货号L9756)至碱性磷酸酶底物溶液将会显著抑制内源性碱性磷酸酶活性(肠同工酶除外)。
注意:使用AEC底物时,不要使用含有酒精的溶液进行复染(如哈式苏木精,酸性酒精),因为通过该方法产生的AEC染色可溶于有机溶剂。禁止对玻片进行脱水处理,重新加入到甲苯(或二甲苯)中,或使用含甲苯的封片剂进行封片。
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